Palīdziet ar pieredzi bioloģijā, lūdzu jautājiet par olbaltumvielu noteikšanu, ogļhidrātu noteikšanu, tauku noteikšanu. Tēma: “Pārtikas kvalitātes analīze. Olbaltumvielu noteikšana testa paraugā
Mērķis: pētīt olbaltumvielu īpašības.
Aprīkojums un reaģenti:- olbaltumvielu šķīdums;
Vara sulfāta šķīdums;
Svina acetāta šķīdums;
Mēģenes
Progress:
- Olbaltumvielu šķīdināšana
Daudzi proteīni izšķīst ūdenī, kas ir saistīts ar brīvu hidrofilu grupu klātbūtni proteīna molekulas virsmā. Olbaltumvielu šķīdība ūdenī ir atkarīga no proteīna struktūras, vides reakcijas un elektrolītu klātbūtnes. Olbaltumvielas ar skābām īpašībām labāk šķīst skābā vidē, un proteīni ar bāziskām īpašībām labāk šķīst sārmainā vidē.
Albumīni labi šķīst destilētā ūdenī, savukārt globulīni ūdenī šķīst tikai elektrolītu klātbūtnē.
Atbalstaudu olbaltumvielas (kolagēns, keratīns, elastīns u.c.) ūdenī nešķīst.
Aprīkojums un reaģenti:- olas baltums;
Destilēts ūdens;
kālija hlorīda šķīdums;
Keratīns (vilna vai mati).
Progress:
Pievienojiet 1 ml destilēta ūdens 2 pilieniem neatšķaidīta olu baltuma un samaisiet. Šajā gadījumā olu albumīns izšķīst, un olu globulīns izgulsnējas kā nelielas nogulsnes.
Vilnā un matos esošā keratīna proteīna šķīdību pārbauda ūdenī un 5% kālija hlorīda šķīdumā.
Norādiet darba rezultātus tabulas veidā:
- Olbaltumvielu denaturēšana ar spirtu.
Iekārtas un reaģenti: olbaltumvielu šķīdums; etanols, mēģenes
- Olbaltumvielu nogulsnēšanās karsējot.
Olbaltumvielas ir termolabili savienojumi, un, karsējot virs 50-60°C, notiek denaturācija. Termiskās denaturācijas būtība ir polipeptīdu ķēdes specifiskās struktūras izvēršana un olbaltumvielu molekulu hidratācijas apvalka iznīcināšana, kas izpaužas ar ievērojamu to šķīdības samazināšanos. Vispilnīgākā un ātrākā nogulsnēšanās notiek izoelektriskajā punktā, t.i. pie vides pH vērtības, kad proteīna molekulas kopējais lādiņš ir nulle, jo šajā gadījumā proteīna daļiņas ir vismazāk stabilas. Olbaltumvielas ar skābām īpašībām izgulsnējas nedaudz skābā vidē, un proteīni ar bāziskām īpašībām izgulsnējas nedaudz sārmainā vidē. Stipri skābos vai stipri sārmainos šķīdumos karsējot denaturētais proteīns neizgulsnējas, jo tā daļiņas tiek uzlādētas un pirmajā gadījumā tām ir pozitīvs lādiņš, bet otrajā - negatīvs lādiņš, kas palielina to stabilitāti šķīdumā.
Aprīkojums un reaģenti: - 1% olu baltuma šķīdums;
1% šķīdums etiķskābe;
10% etiķskābes šķīdums;
10% nātrija hidroksīda šķīdums;
4 mēģenes, turētājs, spirta lampa.
| Pieredze | rezultātus |
| Četrās numurētās mēģenēs ielej 10 pilienus 1% olu baltuma šķīduma. a) pirmo mēģeni uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai. b) otrajā mēģenē pievieno 1 pilienu 1% etiķskābes šķīduma un uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai. c) trešajā mēģenē pievieno 1 pilienu 10% etiķskābes šķīduma un uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai. d) ceturtajā mēģenē pievieno 1 pilienu 10% nātrija hidroksīda šķīduma un uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai. | a) Olbaltumvielu šķīdums kļūst duļķains, bet, tā kā denaturētās proteīna daļiņas nes lādiņu, tās neizgulsnējas. Tas ir saistīts ar faktu, ka olu baltumam ir skābās īpašības(tā izoelektriskais punkts ir pH 4,8) un neitrālā vidē ir negatīvi uzlādēts; b) Olbaltumvielu nogulsnes rodas, proteīna šķīdumam tuvojoties izoelektriskajam punktam un proteīns zaudē lādiņu; c) neveidojas nogulsnes, jo stipri skābā vidē proteīna daļiņas iegūst pozitīvu lādiņu (saglabājas viens no proteīna stabilitātes faktoriem šķīdumā); d) Nogulsnes neveidojas, jo sārmainā vidē palielinās olbaltumvielu daļiņu negatīvais lādiņš. |
Izdarīt secinājumus.______________________________
Nosacījumi uzdevuma izpildei
1. Uzdevuma izpildes vieta (laiks). : uzdevums tiek izpildīts nodarbības laikā
2. Maksimālais laiks uzdevuma izpilde: ____ 90 _______ min.
3. Jūs varat izmantot mācību grāmata, lekciju konspekti
Skala izglītības sasniegumu novērtēšanai:
Vērtēšanas kritēriji: Darba izpilde vairāk nekā 90% – vērtējums “5”,
70-90% - vērtējums “4”,
50 -70% - vērtējums “3”,
Mazāk nekā 50% - vērtējums “2”.
Praktiskais darbs Nr.1
Noteiktas koncentrācijas šķīduma pagatavošana.
Mērķis:
- sagatavot noteiktas koncentrācijas sāļu šķīdumus.
- iemācīties sagatavot noteiktas koncentrācijas šķīdumu, izmantojot svarus un mērtraukus.
Aprīkojums:
- stikla lāpstiņa;
- stikls ar tilpumu 50 ml;
- stikla stienis ar gumijas galu;
- mērcilindrs;
- svari;
- auksts vārīts ūdens.
- sāls;
Teorētiskā daļa
Risinājums-Šī ir viendabīga sistēma, kas sastāv no šķīdinātāja, izšķīdušām vielām un to mijiedarbības produktiem. Šķīdinātājs visbiežāk ir viela, kas tīrā formā ir tāds pats agregācijas stāvoklis kā šķīdumam, vai arī tas ir pārāk daudz.
Atkarībā no to apkopojuma stāvokļa tiek izdalīti risinājumi: šķidrs, ciets, gāzveida. Atbilstoši šķīdinātāja un izšķīdušās vielas attiecībai: atšķaidīts, koncentrēts, piesātināts, nepiesātināts, pārsātināts. Šķīduma sastāvu parasti nosaka šķīstošās vielas saturs tajā formā masas daļa, procentuālās koncentrācijas un molaritāte.
- Masas daļa (
bezizmēra daudzums) ir izšķīdinātā masas attiecība
vielas uz visa šķīduma masu:
W ppm = m rast. vielas/m šķīdums.
- Procentuālā koncentrācija (%) ir vērtība, kas norāda, cik gramu izšķīdušās vielas ir 100 g. risinājums :
W% = m rast. vielas 100%/m risinājums
(mācību grāmata O.S. Gabrieljans, I.G. Ostroumova ķīmija, M. “Akadēmija” 2013, 57. lpp.)
- Molārā koncentrācija, vai molaritāte (mol/litrā) ir vērtība, kas norāda, cik molu šķīstošās vielas ir 1 litrā šķīduma:
cm = m augstums lieta/Mr (šķīdinātājs) V risinājums .
(mācību grāmata O.S. Gabrieljans, I.G. Ostroumova ķīmija, M. “Akadēmija” 2013, 57. lpp.)
Šī e-pasta adrese ir aizsargāta pret mēstuļu robotiem. Lai to aplūkotu, ir jābūt aktivizētam Javascript.
Dalības maksa ir 290 rubļi.
Parastai virtuvei un zinātniskajai laboratorijai ir daudz kopīga. Katlos un pannās notiek sarežģītas lietas. bioķīmiskie procesi. Dažus no tiem varat pavairot mājās un justies kā īsts ķīmiķis
Šodien mēs pētīsim piena sastāvu. Visi bērni zina, ka piens ir ļoti noderīgs produkts. Tiesa, ne visi mīl pienu. Bet tas nemazina tā lietderību. Atcerieties, ka zīdītāji baro savus mazuļus ar pienu. Tāpēc tas ir ļoti barojošs un viegli sagremojams. Piens vienlaikus satur visas pārtikas pamatvielas – olbaltumvielas, taukus un ogļhidrātus. Lielākais daudzums tauki nodrošina enerģiju. Ogļhidrātus pienā sauc par laktozi. Bet atšķirībā no glikozes vai saharozes ( galda cukurs), laktozei gandrīz nav saldas garšas.
Cilvēki ēd galvenokārt govs pienu. Bet piena sastāvs dažādiem dzīvniekiem atšķiras. Analizējiet tabulu un atbildiet uz jautājumiem.
Tagad veiksim dažus eksperimentus ar pienu.
Var paņemt vienu piena paraugu, bet daudz interesantāk ir salīdzināt vairākus paraugus dažādi ražotāji. Ja kādam ir iespēja salīdzināt pienu no veikala un pienu no savas govs vai govīm no fermas, tad tas ir ļoti interesanti.
Diemžēl daudzās rūpnīcās pienu bieži gatavo no piena pulvera vai pievieno parastajam pienam. svaigs piens. Tas var mainīt dažas piena īpašības.
Jums būs nepieciešami: vairāki piena paraugi (noteikti pierakstiet ražotāja nosaukumu), vairākas mēģenes (varat pajautāt ķīmijas skolotājam, ja tas nav iespējams, tad paņemiet mazas glāzes vai pat glāzes), etiķskābi. , vara sulfāts, nedaudz sārma šķīduma vai mazgāšanas soda , pipete (nopērkama aptiekās).
Eksperiments 1. Tauku noteikšana pienā.
IN govs piens parasti satur 3-4% tauku. Jūs droši vien jau zināt, ka tauki nesajaucas ar ūdeni. Bet pienā šie tauki netiek uzreiz atdalīti no ūdens, to var redzēt tikai tad, ja piens ilgstoši stāv. Tad tauki uzpeldēs uz virsmas. Šis būs krēms. Piena tauki ir atrodams pienā bumbiņu veidā, kas ar ūdeni veido emulsiju “eļļa ūdenī”. Tauku lodītes aizsargā spēcīgas un elastīgas proteīna čaulas, tāpēc sadursmē tās nelīp viena pie otras.
Ievietojiet katra piena parauga pilienu uz filtrpapīra. (Mēģiniet, lai pilieni būtu vienādi.) Kad tie ir izžuvuši, izmēriet katras vietas diametru ar lineālu. Jo lielāks tas ir, jo vairāk satura tauki pienā. Tā kā komerciālā piena tauku saturs parasti ir gandrīz vienāds, jūs varat izmantot krējumu izklaidei. Viņiem vajadzētu būt daudz vairāk tauku.
2. eksperiments. Olbaltumvielu noteikšana pienā
Mēģenē ielej dažus ml (mililitrus) piena un uzmanīgi pievieno vienādu tilpumu vāja vara sulfāta šķīduma (gaiši zila) un nedaudz sārma vai mazgāšanas sodas šķīduma gar sienām un samaisa. Parādās violeta krāsa. Tas norāda uz olbaltumvielu klātbūtni pētāmajā produktā.
Piens satur vairāku veidu olbaltumvielas. Galvenais proteīns ir kazeīns. Tieši no kazeīna veidojas biezpiens. Kad piens ir svaigs, visi proteīni ir izšķīdināti. Bet, ja piens ir kļuvis skābs, pamanāt, ka tas kļuvis biezāks - tas ir pārvērties par rūgušpienu. Karsējot, veidosies olbaltumvielu nogulsnes. Šādi tiek pagatavots biezpiens. Bet, ja negribas gaidīt, kad piens saskābst, var pievienot pārtikas skābe– etiķi vai citronu un iegūsti kazeīna nogulsnes.
Eksperiments 3. Kazeīna klātbūtnes noteikšana pienā.
Ielejiet glāzē 5 ēdamkarotes piena, pievienojiet 1 ēdamkaroti etiķskābes (9%) vai dažus pilienus etiķa esence, sajauc. Var redzēt baltu pārslu veidošanos. Tas ir kazeīns.
Eksperiments 4. Sūkalu sagatavošana.
Kad veidojas kazeīna nogulsnes, citi proteīni un laktoze paliek šķidrajā daļā - sūkalās. Lai iegūtu sūkalas, nogulsnes jāfiltrē. Lai to izdarītu, paņemiet nelielu glāzi. Ievietojiet tajā piltuvi. Ievietojiet tajā filtru, kas izgatavots no vairākiem marles vai pārsēja slāņiem, un ielejiet piltuvē pienu ar iegūto biezpienu. Biezpiens (kazeīns) paliks uz filtra, un mēs veiksim citus eksperimentus ar sūkalām.
5. eksperiments. Olbaltumvielu noteikšana serumā.
Tāpat kā 2. eksperimentā, dažiem ml sūkalu jāpievieno vara sulfāta un sārma šķīdums un jāsamaisa. Violetā krāsa norāda, ka pēc kazeīna izdalīšanas sūkalās paliek daudzi citi proteīni. Tāpēc sūkalas ir arī veselīgs un barojošs produkts.
Pieredze 6. Ogļhidrātu noteikšana pienā.
Uz uguns karsējamā krūzē vai apakštasītē jāielej nedaudz sūkalu, un šķidrumam jāiztvaiko. Pēc šķidruma iztvaikošanas sūkalas pārogļojas un parādās salda smarža, kas līdzīga piedeguša cukura smaržai. Mēs esam pierādījuši, ka piens satur ogļhidrātus.
Eksperiments 7. Simpātiskā tinte.
Tā sauc šķidrumus, kas, rakstot, neatstāj uz papīra nekādas krāsainas pēdas. Tekstu var izlasīt tikai pēc īpašas apstrādes – karsēšanas vai mitrināšanas ar noteiktu vielu. Piens ir lieliski piemērots slepenai rakstīšanaiUn. Tāpēc pēdējais uzdevums būs šāds - uzraksti atsauksmi par mūsu sacensībām ar pienu, rūpīgi gludini šo papīra lapu ar ne pārāk karstu gludekli, līdz parādās teksts. Nofotografējiet viņu un novietojiet fotoattēlu zem atbilžu tabulas.
Pētnieciskais darbs.
Piedāvājam salīdzināt vairākus piena veidus, balstoties uz vairākiem rādītājiem – dažādu ražotāju, gan paštaisītu, gan veikalā pirkto.
Veiciet nepieciešamos eksperimentus un aizpildiet tabula.
Jautājumu un atbilžu tabula
| 1. |
Kura piens ir barojošāks - suņiem vai govīm un kāpēc? |
| 2. | Kāpēc visvairāk pilna tauku satura piens(līdz 40% tauku) vaļiem un delfīniem |
| 3. | Bērni bieži jautā: “Kāpēc piens ir balts, ja govs ēd zaļa zāle? Mēģiniet atbildēt uz šo jautājumu. |
| 4. | Vai no visiem piena paraugiem bija iespējams iegūt kazeīna nogulsnes, tas ir, biezpienu? |
| 5. | Kādi citi proteīni ir pienā, izņemot kazeīnu? |
| 6. | Kāpēc daudzi cilvēki, būdami pieauguši, nevar dzert pienu, jo tas izraisa gremošanas traucējumus? Atrodi atbildi uz šo jautājumu grāmatās vai internetā. |
| 7. |
Kādi produkti ir izgatavoti no piena? |
Krāsu reakciju nozīme ir tāda, ka tās ļauj noteikt olbaltumvielu klātbūtni bioloģiskajos šķidrumos, šķīdumos un noteikt dažādu dabisko olbaltumvielu aminoskābju sastāvu. Šīs reakcijas izmanto gan kvalitatīvai, gan kvantitatīvai olbaltumvielu un tajās esošo aminoskābju noteikšanai. Dažas reakcijas ir raksturīgas ne tikai olbaltumvielām, bet arī citām vielām, piemēram, fenols, tāpat kā tirozīns, ar Millona reaģentu piešķir rozā sarkanu krāsu, tāpēc ar vienu reakciju nepietiek, lai noteiktu proteīna klātbūtni.
Ir divu veidu krāsu reakcijas: 1) universāls - biurets (visiem proteīniem) un ninhidrīns (visiem A-aminoskābes un olbaltumvielas); 2) specifisks - tikai noteiktām aminoskābēm gan proteīna molekulā, gan atsevišķu aminoskābju šķīdumos, piemēram, Foll reakcija (aminoskābēm, kas satur vāji saistītu sēru), Milona reakcija (tirozīnam), Sakaguchi reakcija ( arginīnam) utt.
Veicot olbaltumvielu un aminoskābju krāsu reakcijas, vispirms ir jāsagatavo šāda tabula:
Krāsu reakcijas uz olbaltumvielām (kvalitatīvas reakcijas)
Krāsu reakcijas uz proteīniem Eksperiments 1. Biureta reakcija.
Biureta reakcija– kvalitāte visam bez izņēmuma vāveres, kā arī izstrādājumi to nepilnīgi hidrolīze, kas satur vismaz divus peptīdu saites.
Metodes princips. Biureta reakciju izraisa peptīdu saišu klātbūtne olbaltumvielās (-CO-NH-), kas sārmainā vidē veido sarkani violetas krāsas vara sāļus ar vara (II) sulfātu. kompleksi. Biureta reakciju rada arī, piemēram, dažas vielas, kas nav olbaltumvielas biurets(NH2-CO-NH-CO-NH2), oksamīds(NH 2 CO-CO-NH 2), sērija aminoskābes (histidīns, serīns, treonīns, asparagīns).
Biureta reakcija ar glicīnu
Darba kārtība.
1 ml testa 1% proteīna šķīduma pievieno vienādu tilpumu 10% šķīduma. nātrija hidroksīds(NaOH) sārmu un pēc tam 2-3 pilienus 1% šķīduma vara sulfāts(CuSO 4). atšķaidīts, gandrīz bezkrāsains vara sulfāta šķīdums.
Ja reakcija ir pozitīva, parādās violeta krāsa ar sarkanu vai zilu nokrāsu.
Pieredze 2.Reakcijauz "vāji saistītu sēru".
Metodes princips. Tā ir reakcija uz cisteīnu un cistīnu. Sārmainās hidrolīzes laikā cisteīnā un cistīnā diezgan viegli atdalās “vāji saistītais sērs”, kā rezultātā veidojas sērūdeņradis, kas, reaģējot ar sārmu, rada nātrija vai kālija sulfīdus. Pievienojot svina (II) acetātu, veidojas pelēki melnas svina (II) sulfīda nogulsnes.
Darba kārtība.
Mēģenē ielej 1 ml neatšķaidīta vistas proteīna, pievieno 2 ml 20% nātrija hidroksīda šķīduma. Maisījumu uzmanīgi uzvāra (lai maisījums netiktu izmests).
Šajā gadījumā izdalās amonjaks, ko nosaka slapja lakmusa papīra zilums, kas ievests mēģenes atverē (nepieskarieties sienai). Nelielās nogulsnes, kas veidojas, izšķīst vārot, un tad pievieno 0,5 ml svina (II) acetāta šķīduma. Tiek novērotas pelēki melnas svina (II) sulfīda nogulsnes:
Reakcijas ķīmija:
|
melni nogulumi |
1 ml ielej mēģenē. pievieno 2 ml neatšķaidīta vistas proteīna. koncentrēts sārmu šķīdums, ielieciet vairākus katlus. Karstajam šķīdumam pievieno nātrija plumbīta šķīdumu - dzeltenbrūnu vai melna krāsošana. (Nātrija plumbītu pagatavo šādi: 1 ml svina acetāta pa pilienam pievieno sārma šķīdumu, līdz izšķīst svina hidroksīda nogulsnes, kas sākotnēji veido nogulsnes).
Ja proteīna molekulā ir sēru saturošas aminoskābes (cistīns, cisteīns), sērs pakāpeniski tiek atdalīts no šīm aminoskābēm oksidācijas stāvoklī esošā jona veidā – 2, kura klātbūtni nosaka svina jons, kas veido melno krāsu. nešķīstošs svina sulfīds ar sēra jonu:
Pb(CH 3 COO) 2 + 2 NaOH Pb(OH) 2 + 2 CH 3 COONa,
Pb(OH) 2 + 2NaOH Na 2 PbO 2 + H 2 O,
Na 2 S + Na 2 PbO 2 + 2H 2 O PbS + 4NaOH.
3. eksperiments. Olbaltumvielu ksantoproteīna reakcija.
Metodes princips. Šo reakciju izmanto, lai noteiktu a-aminoskābes, kas satur aromātiskos radikāļus. Tirozīns, triptofāns, fenilalanīns, mijiedarbojoties ar koncentrētu slāpekļskābi, veido nitroatvasinājumus, kuriem ir dzeltena krāsa. Sārmainā vidē šo a-aminoskābju nitroatvasinājumi veido oranžas krāsas sāļus. Piemēram, želatīns, kas nesatur aromātiskās aminoskābes, nedod ksantoproteīna testu.
Darba kārtība.
Pievienojiet 0,5 ml koncentrētas slāpekļskābes 1 ml 10% vistas olu baltuma šķīduma. Olbaltumvielu koagulācijas rezultātā mēģenes saturā veidojas baltas nogulsnes vai duļķainība. Sildot, šķīdums un nogulsnes kļūst spilgti dzeltenas. Šajā gadījumā nogulsnes ir gandrīz pilnībā izšķīdušas hidrolīzes rezultātā. Pēc atdzesēšanas pievieno 1–2 ml 20% nātrija hidroksīda šķīduma (līdz šķīdums kļūst oranžs).
Apskatīsim ksantoproteīna reakcijas mehānismu pie tirozīna radikāļa:
Reakcijas ķīmija:
Eksperimenta noformējums: izdariet secinājumu un uzrakstiet reakcijas vienādojumu.
4. eksperiments. Adamkeviča reakcija (uz triptofāna klātbūtni olbaltumvielās).
Metodes princips. Triptofānu saturošie proteīni glioksilskābes un sērskābes klātbūtnē piešķir sarkani violetu krāsu. Reakcija balstās uz triptofāna spēju skābā vidē mijiedarboties ar glioksilskābes aldehīdiem (kas ir koncentrētas etiķskābes piemaisījums), veidojot krāsainus kondensācijas produktus. Reakcija notiek saskaņā ar vienādojumu:
Želatīns nedod šo reakciju, jo. tas nesatur triptofānu. Krāsa rodas triptofāna reakcijas dēļ ar glioksilskābi, kas vienmēr ir etiķskābē kā piemaisījums.
To pašu reakciju uz triptofānu var veikt, etiķskābes vietā izmantojot formaldehīdu, 2,5% koncentrēta H 2 SO 4 šķīdumu. Šķīdumu samaisa un pēc 2-3 minūtēm. kratot pievieno 10 pilienus 5% nātrija nitrīta. Attīstās intensīva violeta krāsa, tas ir pamats metodes princips reakcijas.
Darba kārtība.
Ielej mēģenē dažus pilienus neatšķaidīta proteīna un pievieno 2 ml. ledus etiķskābi un dažus pilienus glioksilskābes. Maisījumu nedaudz karsē, līdz izšķīst nogulsnes, kas veidojas, atdzesē un, spēcīgi sasverot mēģeni, gar sieniņu uzmanīgi izlej koncentrētu H 2 SO 4, lai abi šķidrumi nesajauktos.
Pēc 5-10 minūtēm abu slāņu saskarnē tiek novērota sarkanvioleta gredzena veidošanās.
5. eksperiments. Ninhidrīna reakcija.
Metodes princips. a-Aminoskābes reaģē ar ninhidrīnu, veidojot zili violetu kompleksu (Ruemann purpurs), kura krāsas intensitāte ir proporcionāla aminoskābes daudzumam. Reakcija notiek saskaņā ar šādu shēmu:
Reakcijas ķīmija :
Reakciju ar ninhidrīnu izmanto a-aminoskābju vizuālai noteikšanai hromatogrammās (uz papīra, plānā kārtā), kā arī aminoskābju koncentrācijas kolorimetriskai noteikšanai, pamatojoties uz reakcijas produkta krāsas intensitāti.
Šīs reakcijas produkts satur sākotnējās aminoskābes radikāli (R), kas izraisa dažādas krāsas: zilu, sarkanu utt. savienojumi, kas rodas aminoskābju reakcijā ar ninhidrīnu.
Pašlaik ninhidrīna reakciju plaši izmanto gan atsevišķu aminoskābju atklāšanai, gan to daudzuma noteikšanai.
Darba kārtība.
Mēģenē ielej 1 ml 1-10% atšķaidīta vistas olu baltuma šķīduma un 1-2 ml 1% ninhidrīna šķīduma acetonā. Mēģenes saturu sajauc un rūpīgi karsē ūdens vannā 2-3 minūtes, līdz parādās zili violeta krāsa, kas norāda uz proteīna klātbūtni. α -aminoskābes.
Eksperimenta noformējums: izdariet secinājumu un uzrakstiet reakcijas vienādojumu.
6. eksperiments. Sakaguči reakcija.
Metodes princips. Šīs reakcijas uz aminoskābi arginīnu pamatā ir arginīna mijiedarbība ar a-naftolu oksidētāja klātbūtnē. Tās mehānisms vēl nav pilnībā noskaidrots. Acīmredzot reakcija tiek veikta saskaņā ar šādu vienādojumu:
Tā kā hinona imīnu atvasinājumi (šajā gadījumā naftohinons), kuros iminogrupas –NH– ūdeņradis ir aizstāts ar alkil- vai arilradikāli, vienmēr ir dzeltensarkanā krāsā, tad acīmredzot oranžsarkanā krāsa šķīdums Sakaguči reakcijas laikā ir izskaidrojams ar naftohinona imīna atvasinājuma parādīšanos. Tomēr nevar izslēgt iespēju, ka arginīna atlikuma atlikušo NH grupu un a-naftola benzola gredzena tālākas oksidēšanās rezultātā var veidoties vēl sarežģītāks savienojums:
Darba kārtība.
Līdz 2 ml. Pievienojiet 2 ml 1% atšķaidīta vistas olu baltuma šķīduma. 10% nātrija hidroksīds (NaOH) un daži pilieni 0,2% spirta šķīduma α -naftols. Mēģenes saturs ir labi sajaukts. Tad pievieno 0,5 ml. nātrija hipobromīts (NaBrO) vai nātrija hipohlorīts (nātrija hipohlorīts - NaOCl), samaisa. Tūlīt parādās sarkana krāsa, kas pakāpeniski pastiprinās.
Nekavējoties pievienojiet 1 ml 40% urīnvielas šķīduma, lai stabilizētu strauji augošo oranži sarkano krāsu.
Šī reakcija ir raksturīga savienojumiem, kas satur guanidīna atlikumu
NH = C – NH2,
un norāda uz aminoskābes arginīna klātbūtni proteīna molekulā:
NH = C –NH – (CH 2) 3 –CH –COOH
Eksperimenta noformējums: izdariet secinājumu un uzrakstiet reakcijas vienādojumu.
Albumīns 
Albumīns 
Smago metālu sāļu ietekme uz olbaltumvielām 
Ir vairāki vienkāršus veidus, Kā noteikt proteīnu. Lai to izdarītu, mēs izmantosim dažas no tā raksturīgajām īpašībām.
Viena no grupām, kurā ir sadalītas visas esošās olbaltumvielas, ir olbaltumvielas . Šī grupa ir visizplatītākā un pazīstamākā. Albumīns ir proteīns no vistas olas, kas atrodams cilvēku un dzīvnieku asinīs, kā arī augos, muskuļos un pienā.
Lai noteiktu šo olbaltumvielu grupu, mēs izmantojam tās šķīdības īpašības ūdenī. Ja albumīnus karsē, tie maina savu struktūru, tas ir, tie “sabrūk”.
Tāpēc mēģināsim identificēt proteīnu. Mēs izmantojam, piemēram, govs asins serumu vai olu neapstrādāts proteīns. Liek katliņā, atšķaida ar ūdeni un karsē uz lēnas uguns, līdz vārās. Olbaltumvielu šķīdumā izšķīdina nedaudz sāls un pievieno nedaudz Ocet (etiķskābes).
Reakcijas rezultātā mēs redzēsim, ka no šķīduma izkritīs baltas pārslas.
Nosakiet proteīnu varbūt arī citi vienkāršā veidā: olbaltumvielas maina savu struktūru alkohola ietekmē, tāpēc pietiek ar to pašu spirta tilpumu pievienot proteīna šķīdumam. Tāpat kā iepriekšējā gadījumā, mēs redzēsim, ka proteīns izkrīt baltu pārslu veidā.
Lūk, nākamais interesanta pieredze var saukt arī par noderīgu. Olbaltumvielas var noteikt, izmantojot smago metālu sāļus. Piemēram, vara, dzelzs, svina sāls (vara sulfāts CuSO 4, dzelzs hlorīdi FeCl 2, FeCl 3, svina nitrāts Pb(NO 3) 4 utt.). Ja lai ūdens šķīdums Pievienojiet proteīnam vienu (vai vairākus) no šiem sāļiem, pēc tam proteīna ķīmiskā savienojuma nogulsnes ar smago metālu nogulsnēm. Mūsu ķermenim un dzīvnieku ķermenim smago metālu sāļi ir toksiskas vielas, kas veicina olbaltumvielu iznīcināšanu!
Nosakiet proteīnu Tas ir iespējams arī, iedarbojoties uz neminerālskābēm (izņemot ortofosforskābes H 3 PO 4). Ja mēģenē ielej slāpekļskābi un pēc tam uzmanīgi pilināt proteīna šķīdumu gar mēģenes sieniņu, tad ap mēģenes sienas apkārtmēru izveidosies balts nogulsnētā proteīna gredzens.
Vēl viena olbaltumvielu grupa, ko sauc globulīni - Atšķirībā no albumīns nešķīst ūdenī. Globulīni labi šķīst, ja šķīdumā ir sāļi. Globulīni ir atrodami dažās augu daļās, pienā un dzīvo organismu muskuļos. Turklāt ir konstatēts, ka augos identificētie globulīni izšķīst 70% spirtā!
Un vēl viena olbaltumvielu grupa - skleroproteīni , kas ietver dzīvo organismu audus, piemēram, nagus, matus, acs radzeni, kā arī kaulu audi, dzīvnieku ragi un vilna. Skleroproteīni nešķīst ūdenī un nešķīst spirtā, bet, tos apstrādājot ar stipru skābju šķīdumiem, tie iegūst spēju šķīst un daļēji sadalīties.
Globulīni Un skleroproteīni var noteikt, izmantojot ksantoproteīna reakcija. Šī ir krāsu proteīna noteikšanas reakcija, kurā, ja proteīnu saturošu paraugu karsē, paraugs mainīs krāsu uz dzeltenu. Tad, kad skābi neitralizē ar sārmu, krāsa mainīsies uz oranžu.
Iespējams, ka daži šo reakciju jau ir novērojuši pašu pieredzi kad slāpekļskābe nonāk saskarē ar ādu.
Nākamais proteīna noteikšanas reakcija - biurets, kas sastāv no atšķaidīta nātrija vai kālija sārma šķīduma pievienošanas proteīna šķīdumam. Tam pašam šķīdumam jāpievieno daži pilieni vara sulfāta šķīduma. Mēs novērojam šķīduma krāsas izmaiņas uz sarkanu, pēc tam violetu un zili violetu.
Ja proteīnu ilgstoši karsē skābes šķīdumā, tas sadalīsies tā sastāvdaļās - peptīdos, pēc tam to sastāvā esošajās aminoskābēs, kuras izmanto rūpniecībā pārtikas garšvielu gatavošanai.
Raksti par tēmu
