në shtëpi Dietat

Hetimi i djathit sallam për benzapiren. Metodat e produkteve ushqimore për përcaktimin e pjesës masive të benzo (a) pirenit. Regjistrimi i rezultateve të matjeve

Benzopireni i përket klasës së hidrokarbureve aromatike policiklike - PAH. Ky është një grup i përbërjeve organike në strukturën kimike të të cilave ka unaza benzeni - grupe prej tre unazash ose më shumë. Përkufizimi kimik i benzapirenit: një substancë organike që përmban karbon, e cila bën pjesë në grupin e hidrokarbureve policiklike, me një masë molare prej 252,31 g / mol.

Çfarë është benzapireni

Benzopireni, si të gjithë PAH, është kryesisht rezultat i përparimit teknologjik, pasojë e veprimtarisë njerëzore. Burimet kryesore të ndotjes teknogjene të PAH-ve janë djegia e substancave organike të ngurta dhe të lëngshme, duke përfshirë vajin dhe produktet e naftës, drurin dhe mbetjet antropogjene. Nga burimet natyrore të benzapirenit, vlen të përmenden zjarret në pyje, shpërthimet vullkanike.

Sidoqoftë, formimi i benzapirenit mund të ndodhë edhe pa proceset e djegies - gjatë pirolizës, shkrirjes, polimerizimit.

Benzapireni lirohet gjatë pirjes së duhanit: përmbajtja e benzapirenit në tymin e një cigareje është mesatarisht 0,025 mcg, që është shumë herë më e lartë se MPC (10,000-15,000 herë mesatarisht). Është llogaritur se pirja e një cigareje është e barabartë me gjashtëmbëdhjetë orë thithje të gazit të shkarkimit për sa i përket përmbajtjes së benzapirenit.

Formula e benzopirenit

Ekzistojnë dy izomerë të benzapirenit. E para është 1,2-benzapyrene (3,4-benzpyrene) - që përmbahet në të gjitha produktet e djegies - vaj, katran, qymyr, tym me origjinë të ndryshme, duke përfshirë. Në formën e tij të pastër, këto janë kristale në formë gjilpëre ose pllaka me ngjyrë të verdhë të lehtë, me një pikë shkrirjeje rreth 177 ° C.

4,5-Benzopiren - kristale në formën e gjilpërave dhe pllakave me ngjyrë të verdhë të lehtë, me një pikë shkrirjeje 179 ° C. Përmbahet në katranin e qymyrit, që gjendet në tokë (sidomos pranë ndërmarrjeve dhe autostradave). Nuk ka veti mutagjene ose kancerogjene.

Formula kimike e benzopireneve është C20H12.

Benzopireni në tokë dhe ajër

Benzopireni praktikisht nuk ndodh në gjendje të lirë, por gjithmonë precipiton në grimcat që përmbahen në ajër. Së bashku me masat lëvizëse të ajrit, benzapireni përhapet në një zonë të madhe dhe duke rënë nga ajri së bashku me grimcat e ngurta (për shembull, gjatë reshjeve) hyn në shtresat e tokës, rezervuarët dhe në sipërfaqet e ndërtesave.

Në migrimin dhe akumulimin e benzapirenit, një burim i tillë si transporti rrugor gjithashtu luan një rol. Nga njëra anë, duke lëvizur në distanca të gjata, makinat kontribuojnë në shpërndarjen uniforme të benzapirenit. Nga ana tjetër, benzapireni i vendosur grumbullohet në sasi të mëdha përgjatë autostradave dhe në objektet pranë tyre (të ashtuquajturat "burime dytësore").

Benzopireni "përfshihet" lehtësisht në ciklin e substancave në natyrë: me reshje, të cilat gjithmonë përmbajnë grimca të ngurta, ai bartet edhe në territore të largëta nga burimi kryesor i PAH, hyn në trupat ujorë, nga ku, gjatë proceseve të avullimit, ngrihet. përsëri në ajër. Është kjo aftësia për të migruar që benzapireni çon në faktin se përmbajtja e tij mund të jetë e lartë në vendet ku nuk ka burim të fuqishëm të kësaj substance.

Duke hyrë në mjedis dhe duke u grumbulluar në të, benzapireni depërton në bimë, të cilat më vonë shërbejnë si ushqim për bagëtinë ose përdoren në ushqimin e njerëzve. Përqendrimi i benzapirenit në bimë është më i lartë se përmbajtja e tij në tokë, dhe në ushqim (ose ushqim) është më i lartë se në lëndën e parë për prodhimin e tyre. Ky efekt i rritjes së përqendrimit të kimikateve, përfshirë benzapirenin, quhet bioakumulim.

Kështu, benzapireni është i rrezikshëm jo vetëm si një ndotje mjedisore në sfond, por edhe si një substancë që depërton në trup përmes zinxhirit ushqimor.

MAC e benzapirenit

Metoda kryesore për përcaktimin dhe kontrollin e benzapirenit është kromatografia e lëngshme.

Sipas standardeve higjienike 2.1.6.695-98 dhe 2.1.6.1338-03, sasia mesatare maksimale ditore e lejuar e benzapirenit në ajër (MPCds) është 0.1 μg/100 m3 ose 10-9 g/m3, dhe MPC e tij në tokë. sipas Standardeve Higjienike 2.1. 7.2041-06 - 0.02 mg / kg në total, duke marrë parasysh nivelin e sfondit. Në ajër në vendet e punës, MPC mesatare e ndërrimit nuk është më shumë se 0.00015 mg / m3. (nga pika 1. dhe pika 2. GN 2.2.5. 1313-03).

MPC e benzapirenit në ujë nuk është më shumë se 0.000001 mg/l, në ujin e pijshëm me një sistem të centralizuar të furnizimit me ujë - jo më shumë se 0.000005 mg/l. Në ujë të pijshëm në shishe - nga jo më shumë se 0,001 µg/l (ujë i cilësisë më të lartë) deri në jo më shumë se 0,005 µg/l në ujë në shishe të kategorisë së parë të cilësisë.

Në produktet ushqimore në të cilat prania e benzapirenit është e lejueshme për shkak të veçorive teknologjike, niveli i lejuar i benzapirenit nuk është më shumë se 0,001 mg / kg. Këto përfshijnë: salcice dhe produkte që përdorin nënprodukte, duke përfshirë ato të tymosura; sallo i tymosur; salsiçe dhe produkte të tymosura nga mishi dhe të brendshmet e shpendëve; ushqim i tymosur i konservuar dhe konserva peshku, peshk i tymosur; drithëra ushqimore.

Kur përdorni aromatizues tymi, përmbajtja e benzapirenit nuk është më shumë se 2 µg/kg (l), dhe pas përdorimit të tyre, përmbajtja e benzapirenit në produktet e gatshme nuk duhet të kalojë 0,03 µg/kg (l).

Në produktet e tjera ushqimore, prania e benzapirenit nuk lejohet.

Megjithatë, sipas rezultateve të monitorimit, normat për përmbajtjen e benzapirenit janë tejkaluar shumëfish. Mesatarisht, niveli i ndotjes së ajrit në qytete është 5-12 herë më i lartë se MPC, në tokë - 3-7 herë, në ushqim - nga 1.5 në 11 herë.

Efekti i benzapirenit në trupin e njeriut

Benzopireni klasifikohet si një substancë e klasës së parë të rrezikut. Klasa e parë e rrezikut janë substancat me një ndikim jashtëzakonisht të lartë të rrezikshëm në mjedis, ndërsa ndryshimet e shkaktuara prej tyre janë të pakthyeshme dhe nuk mund të rikthehen.

Benzopireni është një nga kancerogjenët më të fuqishëm por të përhapur. Duke qenë kimikisht dhe termikisht i qëndrueshëm, duke zotëruar vetitë e bioakumulimit, pasi hyn dhe grumbullohet në trup, vepron vazhdimisht dhe fuqishëm. Përveç që është kancerogjen, benzapireni ka një efekt mutagjen, embriotoksik dhe hematotoksik.

Rrugët e depërtimit të benzapirenit në trup janë të ndryshme: me ushqim dhe ujë, përmes lëkurës dhe me frymëmarrje. Shkalla e rrezikut është pavarësisht se si benzapireni ka hyrë në trup. Në eksperimente, si dhe sipas monitorimit të zonave të pafavorshme mjedisore, benzapireni futet në kompleksin e ADN-së, duke shkaktuar mutacione të pakthyeshme që kalojnë në brezat pasardhës. Shqetësues i veçantë është fakti i bioakumulimit të benzapirenit: gjasat e zhvillimit të mutacioneve në brezat e ardhshëm të pasardhësve rriten shumë herë për shkak të bioakumulimit.

DËSHIRONI TË LËNI DUHANIN?

Pastaj bashkohuni me ne për një maratonë për të hequr dorë nga cigaret.
Do ta bëjë shumë më të lehtë lënien.

4.1.2. Metoda për matjen e pjesës masive të benzo(a)pirenit në lëndët e para ushqimore, produktet ushqimore dhe dheun me anë të kromatografisë së lëngshme me performancë të lartë

Qëllimi dhe qëllimi

Metoda është menduar për përcaktimin sasior të benzo(a)pirenit (BP) në lëndët e para ushqimore, produktet ushqimore dhe tokën në fraksionin e tij masiv të treguar në Tabelën. 1. Kufiri i poshtëm i diapazonit të matjes korrespondon me 1/2 e nivelit (përmbajtjes) të lejuar të toksinës në produkte dhe lëndë të para, kufiri i sipërm - pesëfishi i nivelit të lejuar.

Benz (a) pireni është një përbërës kancerogjen shumë toksik dhe përmbajtja e tij e lejuar në produktet ushqimore dhe lëndët e para ushqimore përcaktohet nga Rregullat Sanitare dhe SanPiN 2.3.2.560-96.

Teknika mund të aplikohet nga institucionet e Mbikëqyrjes Shtetërore Sanitare dhe Epidemiologjike të Federatës Ruse, laboratorët e organizatave dhe ndërmarrjeve të tjera që lidhen me kërkimin, analizën kimike dhe certifikimin e produkteve ushqimore. Metodologjia nuk është arbitrazh.

Oriz. 11.14.

1. Naftalinë 9. Chryzen (0.17*)
2. Acenafteni (1.40*) 10. Benz(a)piren
3. Fluoren (2.60*) 11. Benz(b)fluoranten (0.26*)
4. Fenantreni *2.40*) 12. Benz(c)fluoranteni (0.10*)
5. Antraceni (0.13*) 13. Benz(a)piren (0.2*)
6. Fluoranten (0.74*) 14. Dibenz(a,b)antracene
7. Piren (0.67*) 15. BeH3(g, h, i)nepHaen (0.21*)
8. Benz(a)antrakeni (0.07*) 16. Indeno(1,2,3-cc1)piren (0.26*)

Kushtet e analizës:

Kolona: Supelcosil® LC RAS (250 mm x 2.1 mm; 5 µm);

Gradient: Acetonitril (A) 50-100%, ujë (B) 50-0%; 200 µl/min Temperatura: 25°C Vëllimi i mostrës: 10 µl Zbulimi: Sflu, sipas programit

Karakteristikat e gabimit të matjes

Kufijtë e gabimit relativ (±5) të rezultatit të matjes së fraksionit masiv të BP (me një nivel besimi prej 0,95) tregohen në tabelë. një.

Tabela 1. Objektet e analizuara, diapazoni dhe karakteristikat e matjeve

Grupi i produkteve (objekt i analizuar)	Përmbajtja e lejuar ( IV X), mg/kg	Gama e matjes së fraksionit masiv të BP, mg/kg	Koeficient nxjerrja,	Kufijtë relativ të gabimit (±8), %
Mish i tymosur, peshk dhe produkte yndyrore

Instrumente matëse, pajisje ndihmëse, materiale dhe reagentë

Instrumentet matëse

Kromatografët e lëngshëm:

- Mikrokolona "Milicrome-5", TU 25-7405.0009-89, versioni 3 me një detektor fluorimetrik (FlD) (Opsioni 1).
- Kromatograf i lëngshëm isokratik ose gradient, për shembull, "Kpayeg" (Gjermani), Regjistri Shtetëror i Instrumenteve Matëse të Federatës Ruse 16848-97 ose Shtojca kromatografike "VEZHKh-3", LLP "Lumex" (Shën Petersburg), e pajisur me FLD "Fluorat-02 -2M", LLP "Lumex", Regjistri Shtetëror i Instrumenteve Matëse të Federatës Ruse 14093-99 (Opsioni 2).
- Kromatograf i lëngshëm isokratik ose gradient me PLD të çdo lloji, për shembull "Kpaerg" (Gjermani), Regjistri Shtetëror i Instrumenteve Matëse të Federatës Ruse 16848-97 (Opsioni 3).

Kolonat kromatografike "Diasfer-110-S 16", TU 4215-001-05451931-94, CJSC "BioKhimMak ST" (Moskë), me madhësi standarde që korrespondojnë me variantin e sistemit kromatografik:

- 2 x 80 mm, dp = 5 - 7 µm (Opsioni 1)
- 2 x 150 mm, dp = 5 - 7 µm (Opsioni 2)
- 4 x 150 mm, dp = 5 - 7 µm (Opsioni 3)

Kompleksi i harduerit dhe softuerit "MultiChrom-Spectrum", TU AZHRC

3.036.001, CJSC Ampersend (Moskë), ose çdo softuer tjetër që lejon kalibrimin dhe përcaktimin sasior me metodën standarde të jashtme.

GSO 7515-98 e përbërjes së tretësirës së benzo(a)pirenit në acetonitril me përqendrim masiv të benzo(a)pirenit 100 μg/cm 3, AOZT "Ekros" (Shën Petersburg).

GSO 7064-93 përbërja e tretësirës së benzo(a)pirenit në heksan me përqendrim masiv të benzo(a)pirenit 100 µg/cm 3, AOZT "Ekros" (Shën Petersburg).

Peshore laboratorike elektronike 4 qeliza. modeli i saktësisë VLE 134, GOST 24104-88 ose të tjerë.

Mikroshiringa 100 µl nga Hamilton, modeli Microliter #1710 ose ekuivalente.

Mikropipeta 0,5; 0.2; 0,1 μl; GOST 20292-74.

Cilindrat dimensionale 2-25.2-50, 2-100 dhe 2-500, GOST 1770-74.

Balonat vëllimore 2-10-2, 2-100-2, GOST 1770-74.

Pipeta të diplomuara 1, 2, 5, 10 cm 3, GOST 29227-91.

Reagentët dhe materialet

Acetonitril për kromatografi të lëngshme, OP-3 pastërti e lartë, TU 6-09-14-2167-84, e korrigjuar.

Ujë dy-distiluar, TU 6-09-2502-77.

Heksan, kimikisht i pastër, TU 6-09-3375-78, i tharë mbi Na 2 S 04 , korrigjuar.

Benzeni, kimikisht i pastër, GOST 5955-75, i tharë mbi Na 2 S 04 , korrigjuar.

Sulfat natriumi anhidrik, kimikisht i pastër, GOST 4166-76.

Fishekët koncentrues "Diapak": A-3, P-3, C; TU 4215-002-05451931-94, ZAO BioKhimMak ST (Moskë).

Pajisjet ndihmëse

Sistemi i filtrimit dhe degazimit të eluentëve CJSC "BioKhimMak ST" (Moskë) ose të tjerë.

Shishe qelqi 1.8 dhe 5.0 cm 3 për solucione kalibrimi dhe analize me kapak vidhash dhe guarnicione Teflon nga Supelco, numrat e katalogut 2-6951, 2-7037 dhe

2-7039, ose ekuivalent.

Mikropërzier PPE-3, "Ekros" (Shën Petersburg).

Avullues rrotullues IR-1M2, TU 25-1173.102-84 ose të tjerë.

Balona me fund të mprehtë me tapa me një kapacitet 25, 10 dhe 5 cm 3, GOST 25336.

Një pajisje për nxjerrjen e solucioneve në një rrjedhë azoti, e pajisur me një bllok alumini të kontrolluar në mënyrë termostatike (banjë me ajër të thatë) të ndërmarrjes së përbashkët BioMark (Lvov) ose të tjera.

Filtra membranore me dp = 0,4-0,5 μm.

Një pajisje për krijimin e një vakuumi prej rreth 7 mm Hg. Art. (Pompë uji, GOST 25336; Pompë vakum me unazë uji Begemot, UVK-RK2/1, CJSC BioKhimMak ST, Moskë).

Aparat për përgatitjen e kampionit me vakum (kolektor vakum) ose tjetër me marrës mostrash me kapacitet të paktën 10 cm 3 .

Balonë Buechner, gyp Bunsen me një kapacitet prej të paktën 500 dhe 200 cm 3, përkatësisht, GOST 1770.

Hinkë ndarëse me kapacitet 100 dhe 500 cm 3, GOST 25336.

Balona konike me fund të sheshtë me tapa me kapacitet 50, 100 dhe 250 cm 3, GOST 25336.

Balona në formë dardhe me tapa me kapacitet 50 dhe 100 cm 3, GOST 25336.

Hinkë konike me një diametër prej të paktën 10 cm, GOST 1770.

Letër filtri e tipit "blu shirit".

Leshi pambuku mjekësor jo-steril, pambuku.

Metoda e matjes

Teknika përfshin procedurat kryesore të mëposhtme:

- Nxjerrja parësore me heksan dhe riekstraktimi në acetonitril BP nga një mostër e një produkti të tymosur;
- Nxjerrja parësore e BP me një përzierje acetonitrili-uji nga një mostër gruri ose dheu;
- përqendrimi dhe pastrimi i ekstraktit primar me ekstraktim në fazë të ngurtë;
- hollimi i ekstraktit të mostrës së përgatitur me një përzierje acetonitrili-ujë;
- kalibrimi i kromatografit sipas tretësirave me vlerë të njohur të përqendrimit në masë të BP;
- analiza e tretësirës së ekstraktit të mostrës së përgatitur me kromatografi të lëngët me performancë të lartë (HPLC) me regjistrim të sinjalit të fluoreshencës;
- identifikimi i PB të përcaktuar nga parametrat e mbajtjes;
- llogaritja e përqendrimit në masë të PB bazuar në sinjalin analitik të regjistruar dhe karakteristikat e kalibrimit;
- llogaritja e pjesës masive të PB, bazuar në përqendrimin në masë të PB, masën e kampionit të ushqimit dhe vëllimin e tretësirës së ekstraktit të përgatitur.

Kërkesat e sigurisë

Kur punoni me komponimet kimike të përdorura, është e nevojshme të respektoni kërkesat e sigurisë të përcaktuara për punën me substanca toksike, kaustike dhe të ndezshme, GOST 12.1.018-86 dhe GOST 12.1.004-76, kërkesat e sigurisë nga zjarri, GOST 12.1.004 -76.

Nëse solucionet e BP-së bien në lëkurë" ose në sipërfaqet e objekteve, ato duhet të trajtohen me ujë dhe detergjent dhe më pas me alkool etilik. Tretësirat duhet të ruhen në frigorifer në ambalazh të mbyllur.

Kur përdorni sistemin për HPLC dhe kryeni matjet përkatëse, është e nevojshme të respektohen rregullat e sigurisë elektrike, GOST

12.1.019-79 dhe udhëzimet e funksionimit për pajisjen.

Kërkesat e kualifikimit të operatorit

Personat e lejuar për të punuar:

- të kualifikuar si inxhinier kimik ose teknik kimik;
- Të ketë përvojë në një laborator kimik;
- të cilët kanë kryer kurse përkatëse të trajnimit dhe praktikë në laboratorë të akredituar për kryerjen e analizave duke përdorur HPLC;
- ka marrë rezultate pozitive gjatë kryerjes së operacioneve të kontrollit.

Kushtet e matjes

Përgatitja e mostrës, përgatitja e solucioneve, përgatitja dhe kryerja e matjeve kryhen në një temperaturë ambienti prej 18-25 ° C, presion atmosferik prej 84,0-100,7 kPa (630-800 mm Hg), lagështi të ajrit jo më shumë se 80% ( në temperaturë 25 °C).

Gjatë matjeve në laborator duhet të plotësohen këto kushte: tensioni i rrjetit 220 ± 10 V, frekuenca e rrjetit 50zh 1 Hz. Matjet kryhen sipas kushteve të rekomanduara nga përshkrimi dhe udhëzimet e funksionimit të pajisjes.

Përgatitja për të marrë matje

Enë qelqi

Përpara përdorimit të mëtejshëm, enët e qelqit të përdorura shpëlahen me tretësin e fundit të përdorur dhe lahen tërësisht me ujë të nxehtë me çdo pluhur larës, shpëlahen radhazi me ujë të distiluar dhe bidistiluar dhe thahen. Enët e pastra ruhen duke i mbyllur me tapë ose pambuk.

Marrja e mostrave, ruajtja dhe trajtimi

Marrja e mostrave dhe mesatarizimi kryhet në përputhje me dokumentet rregullatore për secilin lloj produkti (GOST 13586.3-83, GOST 27668-88, GOST 9792-73, GOST 7631-85). BP e përcaktuar nxirret nga mostrat e produkteve të tymosura me anë të ekstraktimit me heksan të thatë, pas avullimit të të cilit riekstraktohet në acetonitril. Gjatë nxjerrjes së PB nga mostrat e grurit ose të tokës, përdoret një përzierje e ujit-acetonitrilit (16:84). Përqendrimi dhe pastrimi i mëvonshëm i ekstraktit të mostrës parësore që përmban BP, pavarësisht nga natyra e produktit fillestar, kryhet në përputhje me skemën komplekse të nxjerrjes në fazë të ngurtë duke përdorur tre fishekë koncentrues Diapak A-3, P-3, S. .

Mostrat e përgatitura (ekstraktet e mostrave) treten në një përzierje acetonitrili-ujë (70:30).

Çdo matje e fraksionit masiv të BP përfshin përgatitjen dhe analizën kromatografike të të paktën dy mostrave.

Përgatitja e përzierjeve të tretësve

Përzierjet e tretësve përgatiten me metodën vëllimore në cilindra të shkallëzuar. Vëllimet e nevojshme të acetonitrilit dhe ujit maten me cilindra të veçantë të shkallëzuar dhe më pas përzihen. Ekstraktuesi A: acetonitril-ujë (84:16).

Përgatitja e ekstraktuesve

Për të përgatitur acetonitrilin dhe heksanin të ngopur reciprokisht, tundni rreth 300 cm 3 acetonitril dhe 100 cm 3 heksan në një gyp ndarës me kapacitet 500 cm 3 . Pas ndarjes së tretësve, shtresat merren veçmas: shtresa e poshtme (acetonitrili i ngopur me heksan - ekstraktues B) dhe shtresa e sipërme (heksani i ngopur me acetonitril - ekstraktues C), ndërfaza hidhet.

Përgatitja e eluentëve

Për matjet HPLC, përzierjet acetonitril-ujë përgatiten në raportet e mëposhtme: (90:10) - eluent 90, (84:16) - eluent 84, (80:20) - eluent 80, (70:30) - eluent 70 Eluentët e gatshëm filtrohen përmes një filtri membranor dhe kryhet degazimi me vakum ose termik.

Përgatitja e solucioneve të kalibrimit

GSO e përbërjes së tretësirës BP në acetonitril (shih më lart) hollohet me një përzierje acetonitrili-uji (7:3) përpara përdorimit. Pipeta e marrë

1,0 cm 3 e tretësirës bazë vendoset në një balonë vëllimore me kapacitet 100 cm 3 dhe tretësi shtohet në shenjë. Më pas, me një pipetë merren vëllime të caktuara të tretësirës që rezulton, vendosen në një balonë vëllimore me kapacitet 10 cm 3 dhe tretësi shtohet në shenjë. Vëllimet përkatëse të tretësirave të përdorura për hollimin dhe përqendrimet e solucioneve të kalibrimit 2-5 (Opsioni 1) dhe 3-7 (Opsionet 2, 3) janë paraqitur në Tabelën. 2. Kur përdoret GSO e përbërjes së tretësirës BP në heksan (shih më poshtë), pas avullimit të tretësit në kushtet e mëposhtme, mbetja e thatë rishpërndahet në acetonitril dhe hollohet siç përshkruhet më sipër, duke marrë parasysh vlerën e certifikuar. përqendrimi i GSO.

Tabela 2. Zgjidhje për kalibrimin në analizën e benzopirenit (BP)

Përqendrimi masiv i BP (vlera e certifikuar e GSO), mcg/cm 3	Tretësira fillestare e hollimit	kalibrimi
			Përqendrimi në masë i BP, µg/cm3

*Nuk përdoret për kalibrimin e drejtpërdrejtë të sistemit kromatografik.

Përgatitja e sistemit kromatografik

Kromatografi ndizet dhe përgatitet për funksionim në përputhje me përshkrimin e tij dhe manualin e funksionimit. Instaloni kolonën "Diasfer-110-C 16" me madhësi standarde në përputhje me opsionin e kromatografit (shih më lart). Eluenti me përqendrimin më të lartë të acetonitrilit pompohet përmes sistemit kromatografik derisa të stabilizohet vija bazë e detektorit dhe më pas kushtëzohet në kushtet fillestare të gradientit sipas seksioneve përkatëse të "Kushtet e analizës".

Përgatitja e fishekëve koncentrues

Fishekët koncentrues Diapak A-3 dhe P-3 përgatiten për punë si më poshtë:

1. 3 cm3 sorbent i thatë Diapak A ose P hidhen në një strehë polipropileni 10 cm 3 me një filtër të zëvendësueshëm në pjesën e poshtme. Pjesa e sipërme e zbrazët e kapakut përdoret si gyp për aplikimin e mostrës ose eluentit.
2. Mbërtheni fishekun vertikalisht në një pajisje të përshtatshme vakum dhe trokisni për të formuar një shtresë të sipërme të sheshtë horizontale të sorbentit. Për përgatitjen përfundimtare të fishekut Diapak A-3, mjafton të rregulloni shtresën e sorbentit me një shtupë të vogël pambuku.
3. Për përgatitjen e fishekut Diapak P-3, sorbenti lahet radhazi me 10 cm 3 benzen, aceton dhe. ekstraktuesi A në vakum të ulët (shkalla e pikimit jo më shumë se 1-2 pika në sekondë), duke parandaluar që ajri të hyjë në sorbent. Pas mbushjes së fishekut me aceton, sorbenti lihet të vendoset, futet filtri i sipërm polimer, ngjeshet mbi shtresën e sipërme të sorbentit dhe larja vazhdon. Me të arritur ekstraktuesi A niveli 2-3 cm mbi filtrin, larja ndalet dhe fisheku mbyllet me një prizë të poshtme dhe një mbulesë të sipërme (për ruajtje). Në rast të tharjes aksidentale, fisheku lahet ekstraktuesi A. Para aplikimit të kampionit, prizat hiqen dhe, me një vakum të dobët, mbetjet e përzierjes së ujit-acetonitrilit kalohen në nivelin e filtrit të sipërm, pastaj tretësira e provës derdhet menjëherë. Rigjenerimi i fishekut të ripërdorshëm Diapak P-3 kryhet sipas një skeme të ngjashme, duke përjashtuar heqjen e filtrit të sipërm.

Fisheku koncentrues Diapak C përgatitet për punë si më poshtë:

1. Kapsula polipropileni e gatshme me 1 cm3 sorbent Diapak S mbyllet me spina. Pas heqjes së prizave, fisheku përgatitet për punë duke kaluar përmes tij 5 cm 3 heksan me një shiringë me shpejtësi pikimi 1-2 pika në sekondë.
2. Mostra aplikohet nga graviteti, duke përdorur një trup bosh polipropileni me vëllim 10 cm 3 si hinkë, të fiksuar fort në montimin e sipërm të kapsulës Diapak C.

Përgatitja e mostrës për matje

Nxjerrja e heksanit të benzo(a)pirenit nga një mostër e një produkti të tymosur Një mostër prej 10.0 g të një kampioni të një produkti të tymosur bluhet në një llaç me 30 g sulfat natriumi anhidrik. Përzierja transferohet në mënyrë sasiore në një balonë me fund të sheshtë 100 cm 3 dhe nxirret me 40 cm 3 heksan për të paktën 30 minuta me përzierje. Ekstrakti primar i heksanit i yndyrës totale të kampionit dekantohet dhe kalohet përmes 10 g sulfat natriumi anhidrik në një balonë zhveshëse. Përsëriteni procedurën e ekstraktimit dy herë me dy vëllime prej 20 cm 3 heksan dhe kaloni pjesë të ekstraktit përmes një desikanti në të njëjtën balonë distilimi. Heksani avullohet në një avullues rrotullues në një temperaturë jo më të madhe se 35 ° C derisa aroma të zhduket.

Ekstrakti i yndyrës totale tretet në 20 cm 3 ekstraktuesi B, transferojeni në mënyrë sasiore në një cilindër të shkallëzuar me kapacitet 50 cm 3 dhe sillni vëllimin e tretësirës në 40.0 cm 3 me të njëjtin tretës.

20.0 cm 3 e tretësirës që rezulton transferohet në një gyp ndarës me kapacitet 100 cm 3 dhe PB riekstraktohet në acetonitril me tre vëllime 20 cm 3. ekstraktues B.Çdo herë, duke arritur ndarjen më të plotë të fazave, merret shtresa e poshtme (ekstrakt acetonitrili i BP) dhe avullohet në një avullues rrotullues në një temperaturë jo më të madhe se 50 °С deri në një vëllim 10-15 cm 3. Në mënyrë sasiore (duke përdorur acetonitrilin) transferojeni tretësirën në një cilindër matës me kapacitet 25 cm 3, sillni vëllimin në 21.0 cm 3 me acetonitril, shtoni 4.0 cm 3 ujë të dydistiluar dhe përzieni tërësisht masën që rezulton. ekstrakt ujë-acetonitril i BP.

Nxjerrja e benzo(a)pirenit nga një mostër gruri ose dheu me një përzierje acetonitrili-uji

Një pjesë prej 10-25 g të mostrës transferohet në një balonë me fund të sheshtë, shtohen 50-125 cm 3. ekstraktuesi A, duke respektuar rreptësisht raportin 1:5 të mostrës së produktit me vëllimin e ekstraktuesit dhe trazohet për 1 orë. filtruar ekstrakt ujë-acetonitril i BP përmes një filtri letre në një hinkë Buchner nën vakum dhe shtrydhni precipitatin në filtër.

Para-pastrimi dhe përqendrimi i ekstraktit primar të grurit ose produktit të tymosur

Kaloni përmes fishekut Diapak A-3 25.0 cm 3 dhe më pas 3 cm 3 ekstraktuesi A me një shpejtësi pikimi prej 2-3 pika në sekondë në një balonë marrëse.

Eluati i grumbulluar kalohet përmes fishekut të përgatitur Diapak P-3, dhe më pas 5 cm 3 acetonitril me shpejtësi pikimi 1-2 pika në sekondë, duke i hedhur larjet. Fraksioni i synuar që përmban BP elurohet nga fisheku me një përzierje benzen-acetonitrili (1:1) në një vëllim prej 7 cm 3 me një shpejtësi pikimi prej 1-2 pika në sekondë në një balonë distilimi. Eluati avullohet në një avullues rrotullues në një temperaturë jo më të madhe se 50 °C, 0,5 cm 3 heksan shtohet në balonë dhe tundet tërësisht në një mikropërzier derisa mbetja e thatë të tretet plotësisht.

Pastrimi paraprak dhe përqendrimi i ekstraktit primar të tokës

Kaloni përmes fishekut Diapak A-3 5.0 cm 3 ekstrakt ujë-acetonitril i BP, pastaj 3 cm 3 ekstraktuesi A me një shpejtësi pikimi prej 2-3 pika në sekondë në një balonë marrëse. Transferoni eluatin në një cilindër të shkallëzuar me kapacitet 25 cm 3, shpëlajeni balonën me dy vëllime 5 cm 3 ekstraktuesi A dhe sillni vëllimin e tretësirës në cilindër në 20 cm 3 .

5,0 cm 3 të eluatit të holluar kalohen përmes fishekut të përgatitur Diapak P-3, dhe më pas 5 cm 3 acetonitril me një shpejtësi pikimi prej 1-2 pika në sekondë, duke i hedhur larjet. Fraksioni i synuar që përmban BP elurohet nga fisheku me një përzierje benzen-acetonitrili (1:1) në një vëllim prej 7 cm 3 me një shpejtësi pikimi prej 1-2 pika në sekondë në një balonë distilimi. Eluati avullohet në një avullues rrotullues në një temperaturë jo më të madhe se 50 °C, 0,5 cm 3 heksan shtohet në balonë dhe tundet tërësisht në një mikropërzier derisa mbetja e thatë të tretet plotësisht.

Pastrim i imët i ekstraktit

0,5 cm 3 e tretësirës së kampionit në heksan aplikohet në fishekun e përgatitur Diapak C me anë të gravitetit, më pas balona lahet me dy porcione prej 0,5 cm 3 heksan secila dhe aplikohet në mënyrë sekuenciale në fishek, duke i hedhur të gjitha larjet. BP është elutur me benzen në një vëllim prej 2.0 cm 3 me një shpejtësi 1-2 pika në sekondë në një balonë zhveshëse dhe avullohet në një avullues rrotullues në një temperaturë jo më të madhe se 50 °C. Shpërndani mbetjen e thatë të ekstraktit të kampionit BP në një përzierje acetonitrili-uji (7:3), vëllimet e të cilit tregohen në seksionet "Kushtet e matjes" për çdo variant të sistemit kromatografik (shih më poshtë).

Diplomimi dhe matjet

Kalibrimi i kromatografit

Kromatografi kalibrohet nga futja e njëpasnjëshme (në kushtet e matjes së PB) të vëllimit nominal të tretësirave të kalibrimit (Tabela 2) në rend rritës të përqendrimeve të tyre në masë. Çdo tretësirë injektohet në kromatograf të paktën dy herë. Me vendosjen e saktë të sistemit kromatografik, lartësia e pikut në kromatogramin e tretësirës së kalibrimit me përqendrimin më të ulët duhet të kalojë nivelin bazë të zhurmës për të paktën 10 herë.

Pas përpunimit matematikor të kromatogrameve, fiksohen parametrat e mbajtjes dhe zonat e pikut dhe ndërtohen karakteristikat e kalibrimit (GC), duke reflektuar varësinë e vlerës mesatare të zonës së pikut nga përqendrimi masiv i BP në tretësirën e kalibrimit.

Kontrolloni korrektësinë e ndërtimit të karakteristikave të kalibrimit.

Karakteristika e kalibrimit rindërtohet gjatë ndërrimit të kolonave, pas kryerjes së mirëmbajtjes dhe mirëmbajtjes parandaluese, me rezultate negative të monitorimit të qëndrueshmërisë së GC (shih më poshtë).

Përcaktimi i benzo(a)pirenit

Kushtet e matjes (Opsioni 1)

Për analizë, ekstrakti i përgatitur i kampionit të BP shpërndahet në 0,1 cm 3 të një përzierjeje acetonitril-ujë.

Mënyrat e funksionimit të FMD dhe UVPA vendosen nga tastiera e kompjuterit në përputhje me Manualin e Përdoruesit (HSS "MultiChrome-Spectrum") dhe kontrollohen në monitorë në formën e mëposhtme:

Detektor fluorometrik

gjatësia valore e ngacmimit 296 nm;
gjatësia e valës së emetimit - filtri i dritës nr. 2 (më shumë se 380 nm);
koha e matjes 0,2 s.

Shpërndarëse automatike

vëllimi i rigjenerimit 0,4 cm 3 ;
vëllimi i mostrës 0,04 cm 3;
shpejtësia e rrjedhjes 0,15 cm 3 /min;
shpejtësia e rekrutimit 0,3 cm 3 /min;
Koha e mbajtjes së presionit të gjakut 11 min.
përbërja e eluentëve në enë dhe skema e përpilimit të gradientit të acetonitrilit janë paraqitur në tabelë. 3.

Tabela 3 eluentët

Kushtet e matjes (Opsioni 2)

Për analizë, ekstrakti i mostrës së BP të përgatitur (shih më lart) shpërndahet në 0,5 cm 3 të një përzierjeje acetonitril-ujë.

filtër në vijën e ngacmimit - "X4";
filtri në linjën e shkarkimit - "KhZ";
vëllimi i mostrës 0,02 cm 3;
ndjeshmëria është mesatare;
zbutje - 4;
Niveli i "sfondit" zgjidhet bazuar në rezultatet e regjistrimit të një kromatogrami provë të tretësirës së kalibrimit nr. 3.

shpejtësia e rrjedhjes 0,2 cm 3 /min;
eluent 84;
Koha e mbajtjes së presionit të gjakut është rreth 12 minuta.

Modaliteti i ndarjes së gradientit:

shpejtësia e rrjedhjes 0,25 cm 3 /min;
eluenti 100 në eluentin 70 në 20 minuta;

Kushtet e matjes (Opsioni 3)

Për analizë, ekstrakti i përgatitur i kampionit të BP shpërndahet në 0,5 cm 3 të një përzierjeje acetonitril-ujë.

gjatësia valore e ngacmimit 375 nm;
gjatësi vale emetimi 405 nm;
shpejtësia e rrjedhjes 0,8 cm 3 /min;
vëllimi i mostrës 0,02 cm 3;
konstante kohore 1.0 s.

Mënyra e ndarjes isokratike:

eluent 84;
Koha e mbajtjes së presionit të gjakut është rreth 12 minuta;

Modaliteti i ndarjes së gradientit:

gradient linear nga 30 në 70% eluenti 100 në eluentin 70 në 20 minuta;
Koha e mbajtjes së presionit të gjakut është rreth 14 minuta.

Përvetësimi dhe përpunimi i kromatogrameve

Tretësira e ekstraktit të mostrës futet në kromatograf dy herë. Identifikimi i BP kryhet në bazë të një krahasimi të parametrave të mbajtjes së pikut në kromatogramet e ekstraktit të mostrës dhe tretësirat e kalibrimit. Parametrat e përafërt të mbajtjes tregohen në seksionet "Kushtet e matjes". Identifikimi i besueshëm i përbërjes së përcaktuar korrespondon me ndryshimin midis vlerave të parametrave të mbajtjes për zgjidhjen e kalibrimit dhe kampionit, i cili nuk kalon 0,2 min.

Hollimi i tretësirës së ekstraktit

Kryhet në rast se përqendrimi në masë i BP-së së përcaktuar tejkalon përqendrimin e tij më të lartë në masë në tretësirat e kalibrimit. Tretësira e ekstraktit hollohet dy herë (raporti i hollimit, dil = 2) duke marrë vëllime të barabarta të kësaj tretësire dhe një përzierje acetonitril-ujë (70:30) dhe duke e përzier këtë të fundit. Në rast se një hollim i vetëm nuk eliminon "shkallën jashtë", procedura përsëritet (shkalla e hollimit, dil = 4).

Përpunimi i rezultateve të matjeve

Llogaritni vlerën mesatare të zonës së pikut (sinjali i daljes së kromatografit) për dy injeksione të tretësirës së ekstraktit të mostrës në kromatograf. Kontrolloni konvergjencën e sinjaleve të daljes (shih më poshtë).

Sipas varësisë së kalibrimit, gjendet vlera e përqendrimit në masë të BP në tretësirë, që korrespondon me vlerën mesatare të zonës së pikut.

Pjesa masive e BP (I^), mg/kg, në kampionin e i-të (rezultati i përcaktimit) llogaritet me formulën

ku Cbp është përqendrimi masiv i lëndës analitike në tretësirën e ekstraktit të kampionit të i-të të BP, μg/cm 3 (llogaritur sipas varësisë së kalibrimit, bazuar në vlerën mesatare të sipërfaqes së pikut); Vp- vëllimi i tretësirës së ekstraktit të /-të kampionit të BP, cm 3; R- shkalla e nxjerrjes së BP në fazën e përgatitjes së mostrës sipas tabelës. 2; M eq- masa e pjesës së kampionit që korrespondon me proporcionin e ekstraktit të ujit-acetonitrilit të BP që përdoret për pastrimin dhe përcaktimin pasues kromatografik - masa ekuivalente e kampionit, e cila është 5,0 g (kokërr, produkte të tymosur) ose 0,25 g (dhe).

Në rastin e hollimit të ekstraktit (shih më lart), fraksioni masiv i BP ( W,-, mg/kg) në dimensionin /-të llogaritet me formulë

ku wj- vlera e përftuar nga formula (II. 1), dil - shkalla e hollimit (shih më lart).

Llogaritni vlerën mesatare të pjesës masive të BP për dy mostra (rezultati i analizës):

Kontrolloni konvergjencën e rezultateve të përcaktimit të pjesës masive të BP (shih më poshtë).

Regjistrimi i rezultateve të matjeve

Rezultati i analizës (matjes) së pjesës masive të PB në objektin që përcaktohet është paraqitur në formën

ku W- Pjesa masive e PB, e llogaritur me formulën (II.3).

Nëse PB nuk zbulohet, rezultati i matjes paraqitet në formular

ku P "ds është përmbajtja e lejuar e BP sipas Tabelës 1.

Kontrolli i gabimit MVI

Kontrolli i konvergjencës së sinjaleve dalëse të kromatografit

Kontrolli kryhet gjatë kalibrimit dhe analizës së çdo kampioni në lidhje me sinjalet dalëse (vlerat e zonave të pikut të BP në kromatograme) të marra me dy injektime të tretësirës në kromatograf. Rezultati i kontrollit konsiderohet i kënaqshëm nëse diapazoni i sinjaleve dalëse, referuar mesatares aritmetike, nuk kalon 8%.

Kontrolli i korrektësisë së ndërtimit të karakteristikës së kalibrimit

Kontrolli kryhet në çdo kalibrim. Rezultati i kontrollit njihet si i kënaqshëm nëse plotësohen kushtet për çdo zgjidhje të kalibrimit

ku sj- vlera mesatare e zonës së pikut të BP për zgjidhjen e kalibrimit y ", c.u.; S)- vlera e zonës së pikut që korrespondon me karakteristikën e kalibrimit të përqendrimit masiv të BP në tretësirën y "të kalibrimit, c.u.

Kontrolli i qëndrueshmërisë së karakteristikës së kalibrimit

Kontrolli kryhet çdo ditë përpara fillimit të punës me mostrat e analizuara sipas solucionit të kontrollit, i cili përdoret si një zgjidhje kalibruese me një përqendrim masiv të BP që korrespondon me përmbajtjen e tij të lejuar në objektin e analizuar.

Rezultati i kontrollit njihet si i kënaqshëm nëse plotësohet kushti

ku C ki - vlera e përqendrimit në masë të BP në tretësirën e kontrollit, e gjetur nga karakteristikat e kalibrimit për vlerën mesatare të zonës së pikut, µg/cm 3 ; Me to - vlera e përqendrimit masiv të BP në tretësirën e kontrollit sipas tabelës. 2.

Kontrolli i konvergjencës së rezultateve të përcaktimit

Kontrolli kryhet në çdo analizë (matje). Rezultati i kontrollit konsiderohet i kënaqshëm nëse diapazoni i rezultateve të përcaktimeve, referuar mesatares aritmetike (rezultati i analizës), nuk kalon 10%.

Kontrolli i gabimeve me metodën e aditivëve

Kontrolli kryhet:

a) para fillimit të aplikimit të kësaj MVI - pa dështuar;
b) kur shfaqen rezultate të dyshimta të përcaktimit të pjesës masive të BP;
c) në përputhje me planet e kontrollit intralaborator;
d) me kërkesë të organizatave që kontrollojnë veprimtarinë e laboratorit.

Aditivi formohet në bazë të zgjidhjes së kalibrimit. Vlera shtesë (D, mg/kg) zgjidhet në mënyrë që fraksioni masiv i BP në kampion të rritet me 1,5-2,5 herë. Llogaritja kryhet sipas formulës

ku C D- përqendrimi në masë i BP në tretësirën e kalibrimit, µg/cm 3; Vo- vëllimi i tretësirës së kalibrimit BP të futur në kampion, cm3; M fw- pesha ekuivalente e kampionit të marrë për analizë, g.

Aditivi futet në ekstraktin parësor të një kampioni kokrre ose toke në formën e një solucioni kalibrues të përgatitur në përputhje me Tabelën. 2. Shtesa futet në ekstraktin primar të produktit të tymosur në formën e një tretësire me një përqendrim të ngjashëm në heksan. Për ta bërë këtë, GRM e përbërjes BP në heksan (shih më lart) hollohet (duke marrë parasysh korrigjimin për vlerën e përqendrimit të certifikuar) në përputhje me procedurën për përgatitjen e zgjidhjeve të kalibrimit (shih më lart), duke përdorur heksan si tretës dhe duke marrë një zgjidhje të përqendrimit të kërkuar. Kur përdorni përbërjen GSO të BP në acetonitril pas avullimit të tretësit, mbetja e thatë shpërndahet sërish në heksan dhe hollohet me heksan, siç përshkruhet më sipër.

Analiza e dy mostrave me përmbajtje natyrale të PB dhe dy kampioneve me shtimin e BP kryhet në të njëjtat kushte (një instrument, një karakteristikë kalibrimi, një operator). Rezultati i kontrollit njihet si i kënaqshëm nëse plotësohet kushti

ku W D- fraksioni masiv i PB në mostrat me aditivë, mg/kg; W- Pjesa masive e BP në mostrat pa aditivë, mg/kg ( W D dhe W- vlerat mesatare të fraksionit masiv për dy mostra me rezultate pozitive të kontrollit të konvergjencës).

Një ilustrim i aplikimit të kësaj teknike në ekoanalitikën praktike mund të shërbejë si një kromatogram dhe një grafik kalibrues për përcaktimin e benzo(a)pirenit në produktet ushqimore (Figurat 11.15 dhe 11.16).

Rezultatet e kontrollit të gabimit në përcaktimin e benzo(a)pirenit në objekte me metodën e shtesave me zbulim fluorimetrik 375 Ex/405 Et (Varianti 3).

Niveli i aditivit korrespondon me 0,5 të përmbajtjes së lejuar të benzapirenit (0,0005 mg/kg - drithëra dhe produkte të tymosur, 0,01 mg/kg - tokë).

Oriz. 11.15.

Diplomimi për komponentin: BaP Koeficienti i korrelacionit: 0.999667 Përgjigja: Zona

Kanali i referencës 365 Ex/405 Em

Formula Y = Ki X

Vlerat 100 ( W D - W-D)/D janë 10 dhe 16% për mostrat 1 dhe 2, respektivisht. Përbërja e përcaktuar në mostrën fillestare të miellit të grurit është e pranishme në sasinë 0.00009 kg/kg.

Mostra 1 - 0,00064 mg/kg Mostra 2 - 0,00067 mg/kg

Në rastin e përgjithshëm, karakteristika e kalibrimit ka formën S = AC + B, ku S është zona e pikut, c.u.; C është përqendrimi në masë i ndotësit, µg/cm3; A dhe B janë koeficientë.

Hidrokarburet aromatike policiklike: vetitë fiziko-kimike dhe efektet biologjike. Rishikimi i metodave për përcaktimin e benzapirenit. Përcaktimi i benzapirenit në ujë me kromatografi të lëngshme me performancë të lartë me zbulim fluoreshente.

Dërgoni punën tuaj të mirë në bazën e njohurive është e thjeshtë. Përdorni formularin e mëposhtëm

Studentët, studentët e diplomuar, shkencëtarët e rinj që përdorin bazën e njohurive në studimet dhe punën e tyre do t'ju jenë shumë mirënjohës.

Postuar ne http://www.allbest.ru/

Kjo punë e kursit përmban 30 faqe, 1 seksion, 4 nënseksione, 14 paragrafë, 6 tabela dhe 9 figura. Në fund të punës së kursit është një listë e referencave, e përbërë nga 14 artikuj.

Objekti i hulumtimit tim është benzo(a)pireni, vetitë e tij, efekti kancerogjen, si dhe metodat për përcaktimin e tij. Puna e kursit paraqet metoda të tilla si kromatografia e gazit me zbulim spektroskopik masiv dhe kromatografia e lëngshme me performancë të lartë me detektim fluoreshence. Për më tepër, u konsideruan detektorë që janë të përshtatshëm për regjistrimin e sinjalit analitik të benzo(a)pirenit dhe u vërtetua racionaliteti i përdorimit të një ose një detektori tjetër.

Gjithashtu në punën e lëndës janë paraqitur metodat për përcaktimin e benzo(a)pirenit në ujë, që konsiston në përgatitjen e mostrës, kalibrimin e kromatografit, analizën dhe regjistrimin e të dhënave. Punimi paraqet kromatogramet e përftuara me këto metoda.

Fjalët kyçe: HIDROKARBONET AROMATIK POLICIKLIKE, BENZO(A)PIREN, KROMATOGRAFIA LËNGËSH ME PERFORMANCË TË LARTË, KROMATOGRAFIA E GAZIT, ZBULIMI FLUORESHENT.

Puna e kursit Tazi përfshin 30 faqe, 1 seksion, 4 nënseksione, 14 pikë, 6 masi dhe 9 numra. Në buzë të veprës kursive jepet një listë me literaturë, duke filluar nga pika 14.

Celta në studimin tim të benzo (a) pirenit, vetitë mohuese, efektet kancerogjene dhe disi metoda për të nuk është përcaktuar. Puna e kursit duke përfshirë metoda të tilla si kromatografia e gazit me kurbën spektrale të masës dhe kromatografia me efikasitet të lartë me kurbë fluoreshence. Kështu konsiderohen detektorët, të cilët janë të përshtatshëm për marrjen analitike të një sinjali nga benzo(a)pireni dhe përdorim të justifikuar në detektor.

Pra, gjatë punës në pellg, paraqesim metodat e përcaktimit të benzo (a) pirenit në ujë, që përbëhet nga përgatitja në mostër, kalibrimi në kromatograf, analiza dhe regjistrimi i të dhënave. Karta që paraqet të dhëna, duke marrë sipas metodologjisë.

Mendimet kryesore: UJI AROMATIK POLICIKLIK, Benz(A)PIREN, KROMATOGRAFIA TEKNË SHUMË EFIKASE, KROMATOGRAFIA E GAZIT, HAPJA FLUORISENTE.

Puna e kursit u dha për të mbuluar 30 anë, 1 ndarje, 4 nëndosje, 14 pikë, 6 tabela dhe 9 vizatime. Në përfundim të punës së kursit, lista e literaturës, e cila përbëhet nga 14 pikë.

Rreth "kërkimit tim mbi benz (a) pirenin, fuqinë e tij, kancerogjenitetin, si dhe metodat e identifikimit të tij. Në punën e kursit, metoda të tilla si kromatografia e gazit me zbulimin e spektroskopisë masive janë shumë efektive, por kromatografia është shumë efektive dhe fluoreshente. Detektorë që janë të përshtatshëm për regjistrimin e një sinjali analitik në benzo (a) pirene dhe arsyeshmëria e detektorit tjetër është e vërtetuar.

Gjithashtu, në punimin e lëndës është paraqitur metodologjia për përcaktimin e benzo(a)pirenit në ujë, e cila konsiston në përgatitjen e mostrës, kalibrimin me kromatograf, analizën dhe regjistrimin e të dhënave. Robotët përfaqësohen nga kromatogramet, të marra nga këto metoda.

Fjalët kyçe: KARBOHIDRATE AROMATIK POLICIKLIKE, Benz(A) PIRENE, KROMATOGRAFIA RIDINNA SHUMË EFIÇENCA, KROMATOGRAFIA E GAZIT, ZBATIMI FLUORESHENT.

SIMBOLET

PREZANTIMI

1. SHQYRTIMI I LITERATURËS

1.1.1 Informacion i përgjithshëm

1.1.2 Origjina e PAH-ve

1.1.4 Veprimi biologjik

1.1.5 Benz(a)piren. Informacion i pergjithshem

1.2 Metodat për përcaktimin e benzapirenit

1.2.1 Kromatografia me gaz

1.3 Përcaktimi i benzapirenit në ujë me HPLC

1.3.2 Përgatitja e mostrës

1.3.3 Diplomimi

1.3.4 Kryerja e analizës HPLC

1.3.5 Regjistrimi dhe përpunimi i të dhënave

1.4.2 Kuantifikimi i PB

BIBLIOGRAFI

SIMBOLET

PAH - hidrokarbure aromatike policiklike

BP - benzo(a)piren

MPC - përqendrimi maksimal i lejuar

MPC SS - përqendrimi mesatar ditor maksimal i lejuar

HPLC - kromatografi e lëngshme me performancë të lartë

GC - kromatografi me gaz

LC - kromatografi e lëngshme

NPC - kromatografia e fazës normale

RPCH - kromatografi me fazë të kundërt

LLE - nxjerrja e lëngshme-lëngshme

OFS - sorbent me fazë të kundërt

TLC - kromatografi me shtresë të hollë

PREZANTIMI

Hidrokarburet aromatike policiklike (PAH) i përkasin grupit të ndotësve organikë të qëndrueshëm. Kanë veti të theksuara kancerogjene. Një nga përfaqësuesit më të rrezikshëm të PAH-ve është benzo(a)pireni (BP).

Benz (a) pireni u zbulua në vitin 1933, më vonë, në 1935, u kryen studime që konfirmuan kancerogjenitetin e tij. Sot, benzo(a)pireni klasifikohet si kancerogjen i klasës së parë të rrezikut. Ka veti mutagjene. Edhe një përqendrim i vogël i presionit të gjakut ndikon negativisht në trupin e njeriut. Përqendrimi i BP në ajër që tejkalon përqendrimin maksimal të lejuar (MAC) me ekspozim të zgjatur mund të shkaktojë kancer të mushkërive. Prandaj, problemi i zbulimit dhe përcaktimit të tij është akut. Bazuar në vetitë e tij fiziko-kimike, u zhvilluan një sërë metodash të ngjashme për përcaktimin e tij, të ndryshme vetëm në fazat e marrjes së mostrave dhe përgatitjes së mostrës. Qëllimi i punës sime ishte të njihesha me vetitë e PAH dhe BP, të studioja metodat për ndarjen e PAH dhe metodat për përcaktimin e BP.

1. SHQYRTIMI I LITERATURËS

1.1 Hidrokarburet aromatike policiklike (PAHs)

1.1.1 Informacion i përgjithshëm

PAH-të janë komponime organike me molekulare të lartë të serisë së benzenit, që numërojnë më shumë se 200 përfaqësues. Ato përmbajnë nga 2 deri në 7 unaza benzeni. PAH-të janë të shpërndarë gjerësisht në natyrë dhe janë të qëndrueshme me kalimin e kohës. Kanë aktivitet kancerogjen dhe mutagjen. Për shkak të toksicitetit dhe vetive të tyre kancerogjene, ato klasifikohen si ndotës prioritare. Përcaktimi i PAH-ve përdoret në studimet ekologjike dhe gjeokimike. Më toksikët prej tyre janë 3, 4-benz(a)pireni dhe 1,12-benzperyleni, të cilët përcaktohen veçanërisht shpesh në objektet mjedisore.

1.1.2 Origjina e PAH-ve

PAH-të janë një nënprodukt i padëshirueshëm i djegies së lëndëve djegëse fosile. Ato formohen në natyrë për shkak të proceseve abiogjene. Mijëra ton PAH të çliruar nga përbërësit humikë të tokës hyjnë në biosferë çdo vit. Por shumica e këtyre kancerogjenëve vijnë nga proceset e krijuara nga njeriu.

Qymyri konsiderohet të jetë një përzierje e një sasie të madhe të bërthamave aromatike të benzenit të polikondensuar me një përmbajtje minimale hidrogjeni. Kur këto substanca digjen në furra, termocentrale, motorë me djegie të brendshme, këto përbërës dekompozohen. Në temperatura të ulëta të djegies dhe furnizim të pamjaftueshëm të oksigjenit atmosferik, formohen acetilen reaktive dhe hidrokarbure alifatike. Acetileni polimerizohet në butadien, i cili më pas formon bërthamën e një hidrokarburi aromatik. Kur shtohen në bërthamat aromatike ekzistuese, prodhohen PAH.

Djegia jo e plotë prodhon grimca të karbonit - blozë. PAH-të absorbohen në sipërfaqen e tij dhe hyjnë në mjedis.

1.1.3 Vetitë fizike dhe kimike të PAH-ve

Shumica e PAH-ve janë komponime kristalore (me përjashtim të disa derivateve të naftalinës) me një pikë shkrirjeje të lartë. PAH janë pak të tretshëm në ujë. Kur kalohet në tretës organikë, tretshmëria e tyre rritet dhe varet nga pesha e tyre molekulare. Si rregull, me një rritje të numrit të unazave aromatike dhe radikalëve alkil, tretshmëria e PAH zvogëlohet.

Shumica e PAH-ve thithin intensivisht rrezatimin UV (300-420 nm) dhe fotooksidohen me shpejtësi në atmosferë për të formuar kinone dhe komponime karbonil.

1.1.4 Veprimi biologjik

PAH-të hyjnë në trup përmes traktit respirator, lëkurës ose traktit tretës.

Lloji i ndërveprimit të PAH me trupin varet kryesisht nga vetë hidrokarburet. Në thelb, kur PAH-të hyjnë në trup, enzimat formojnë një përbërje epoksi që reagon me guaninën, e cila ndërhyn në sintezën e ADN-së, shkakton çrregullime ose çon në mutacione që kontribuojnë në zhvillimin e kancerit.

Një nga PAH më toksike, siç u përmend më herët, është BP. Përveç kësaj, aktiviteti kancerogjen i PAH është 70-80% për shkak të ndikimit të BP. Prandaj, prania e BP në produktet ushqimore mund të përdoret për të gjykuar praninë e PAH-ve të tjerë.

1.1.5 Benz(a)piren. karakteristikat e përgjithshme

Benz (a) pireni (C 20 H 12) është një përbërje kimike, përfaqësuese e familjes së hidrokarbureve policiklike (Fig. 1.1), një substancë e klasës së parë të rrezikut. Formohet gjatë djegies së lëndëve djegëse hidrokarbure të lëngshme, të ngurta dhe të gazta (në një masë më të vogël gjatë djegies së lëndëve djegëse të gazta).

Figura 1.1 Formula strukturore e benzo(a)pirenit.

BP është pllaka ose hala e verdhë. Është shumë i tretshëm në tretës jopolarë, për shembull, në toluen, benzen, ksilen. Është pak më pak i tretshëm në tretës polare, por praktikisht i patretshëm në ujë.

BP grumbullohet kryesisht në tokë, më rrallë në ujë. Nga toka, ajo hyn në bimë, duke vazhduar lëvizjen e saj përgjatë zinxhirit trofik. Në çdo nivel tjetër, përmbajtja e benzo(a)pirenit rritet me një renditje madhësie.

BP është një kimikat tipik kancerogjen dhe është i rrezikshëm për njerëzit edhe në përqendrime minimale, pasi ka vetinë të grumbullohet në trupin e njeriut. MPC e benzo(a)pirenit në objekte të ndryshme është paraqitur në tabelën 1.1. Përveç kësaj, BP ka veti mutagjene, d.m.th. mund të shkaktojë mutacione.

Tabela 1.1 MPC e benzo(a)pirenit në mjedise të ndryshme

Emri i objektit	MAC, mcg/kg

produkte të tymosura

Drithërat
Ujë i pijshëm
Rezervuaret e ujit

Në ajër, përqendrimi mesatar ditor maksimal i lejuar (MPC CC) është 0.1 µg/100m 3.

1.2 Metodat për përcaktimin e benzo(a)pirenit

Metodat kryesore për përcaktimin e PAH-ve janë kromatografia e lëngshme me performancë të lartë të fazës së kundërt (HPLC) me zbulim fluorimetrik ose spektroskopik dhe kromatografia e gazit (GC) me selektive në masë, jonizimi me flakë, kapja e elektroneve ose zbulimi i fotojonizimit.

Për të përcaktuar PB, përdoret gjithashtu metoda e spektroskopisë lumineshente bazuar në efektin Shpolsky. Thelbi i efektit qëndron në faktin se në temperatura të ulëta disa molekula poliatomike japin spektra të lumineshencës kuazi-lineare me rezolucion të lartë. Avantazhi i kësaj metode është kërkesa e ulët për shkallën e pastrimit dhe ndjeshmërisë. Por kompleksiteti i harduerit është një kufizim domethënës për përkufizimin e BP.

Kromatografia është një metodë e ndarjes, analizës dhe studimeve fiziko-kimike të substancave bazuar në lëvizjen e një zone të një lënde përgjatë një shtrese sorbente në një rrjedhë fazore të lëvizshme me përsëritje të shumta të akteve të absorbimit dhe desorbimit. Ndarja ndodh për shkak të ndryshimit në konstantet e shpërndarjes së substancave individuale midis dy fazave. Tipari më i rëndësishëm i kromatografisë është natyra dinamike e procesit, në të cilin ndodhin gradientë në shpërndarjen e përqendrimit të molekulave ose grimcave.

Skema e përgjithshme për ndarjen e përbërësve të përzierjes është paraqitur në figurën 1.2.

Figura 1.2 Skema e zbatimit të procesit kromatografik

Përparësitë e metodave kromatografike përfshijnë mundësinë e zbatimit të njëkohshëm të një numri të madh parametrash që karakterizojnë ndarjen, identifikimin dhe sasinë e përbërësve në një përzierje. Kështu, kromatografia është një burim shumëkanalësh informacioni.

Në varësi të gjendjes së grumbullimit të fazës së lëvizshme, metodat kromatografike ndahen në kromatografi të gazit dhe të lëngët.

Kromatografia e gazit, nga ana tjetër, në varësi të gjendjes së grumbullimit të stacionares (stacionare), përfshin kromatografinë e fazës së lëngshme dhe gazit të ngurtë.

Kromatografia e lëngshme ndahet në fazë të lëngshme-lëngshme, të lëngshme-ngurtë dhe të lëngshme-xhel.

1.2.1 Kromatografia me gaz

GC është një lloj kromatografie në të cilën faza e lëvizshme është në gjendje të gazit ose avullit - një gaz inert. Është një gaz bartës. Faza e palëvizshme është një lëng me peshë të lartë molekulare, i cili fiksohet në një bartës poroz ose në muret e një tubi të gjatë kapilar.

GC është një metodë universale për ndarjen e përzierjeve të substancave që avullojnë pa dekompozim. Përbërësit e përzierjes lëvizin nëpër kolonën kromatografike me një gaz bartës. Në këtë rast, përzierja shpërndahet në mënyrë të përsëritur midis gazit bartës dhe fazës së palëvizshme. Ndarja ndodh për shkak të tretshmërisë së ndryshme të përbërësve të përzierjes në fazën e ngurtë. Në daljen e substancave nga kolona, ato regjistrohen duke përdorur një detektor.

Detektori është një pajisje e vazhdueshme që regjistron një sinjal analitik. Rreth 60 lloje sistemesh zbulimi janë propozuar për GC. Tabela 1.2 liston llojet e detektorëve më të përdorur në GC.

Tabela 1.2 Detektorët e kromatografisë së gazit

Emri i detektorit	Parimi i funksionimit
Nga përçueshmëria termike	Regjistrohet ndryshimi në përçueshmërinë termike midis analitit dhe gazit bartës
Emri i detektorit	Parimi i funksionimit
Kapje elektronike	Kapja nga analitet e elektroneve termike të krijuara nga rrezatimi me grimcat β ose elektrone me energji të lartë të gazit bartës
UV	Thithja e dritës ultravjollcë nga një kromofor specifik analitik
plazma me mikrovalë	Ngacmimi i një analiti në një plazmë me mikrovalë dhe emetimi i dritës në gjatësinë e valës karakteristike të elementit të pranishëm në substancë
Fotometrike e flakës	Ngacmimi i analitit në një flakë dhe emetimi i dritës në varësi të llojit të elementit të pranishëm në substancë
Spektrometër absorbues atomik	Atomizimi termik i ndjekur nga thithja e dritës në një gjatësi vale specifike
Elektrokimike	Thithja e substancave të analizuara nga një rrjedhë lëngu dhe zbulimi i tyre elektrokimik në rrjedhë
Spektrometër IR	Thithja e dritës në rajonin IR nga analitja
Jonizimi i flakës	Formimi dhe regjistrimi i joneve në flakë gjatë djegies së substancave të analizuara
Spektrometër masiv	Formimi i joneve molekulare dhe të fragmenteve nga ndikimi i elektronit ose jonizimi kimik
fotojonizimi	Formimi fotokimik dhe regjistrimi i joneve nën veprimin e rrezatimit të fortë UV në analit

Detektori i jonizimit të flakës është i ndjeshëm, por jo selektiv ndaj BP. Prandaj, përdoret vetëm për analizën e përzierjeve të thjeshta.

Detektori i kapjes së elektroneve është njëkohësisht i ndjeshëm dhe selektiv ndaj BP, por aplikimi i tij është i vështirë për shkak të reagimit të lartë ndaj komponimeve elektrofile.

Përdorimi i fotojonizimit është premtues për përcaktimin e BP, por ai nuk ka gjetur shpërndarje të gjerë për shkak të paqëndrueshmërisë së funksionimit dhe kostos së lartë të pajisjeve.

GC me zbulimin spektrometrik masiv është zgjidhja më e mirë për përcaktimin e benzapirenit në përzierjet komplekse

Parimi i funksionimit të spektrometrit të masës është shpërndarja e fragmenteve ose joneve sipas masës. Procesi i jonizimit përdoret për të kthyer molekulat neutrale në jone. Ndikimi i elektronit përdoret më shpesh për të jonizuar komponimet organike. Përveç kësaj, përdoret jonizimi kimik, i cili bazohet në shfaqjen e reaksioneve jon-molekulare. Për të studiuar molekulat biologjike, polimeret dhe substancat e tjera që nuk mund të transferohen në fazën e gazit pa dekompozim, përdoren lloje të veçanta të jonizimit.

GC me zbulimin spektroskopik masiv është metoda e vetme që lejon përdorimin e standardeve të brendshme për përcaktimet sasiore. Përzierjet izomere të PAH të etiketuara 2 H dhe 13 C përdoren si substanca standarde. Zhvendosja e peshës dhe fakti që substancat referente kanë pothuajse të njëjtat karakteristika si PAH të paetiketuara lehtëson identifikimin.

Një nga disavantazhet e vogla të spektrometrit të masës është diapazoni i vogël i linearitetit të përgjigjes së detektorit. Prandaj, një spektrometër masiv konvencional zëvendësohet nga ai i kohës së fluturimit. Karakteristika e tij është se në një kohë të shkurtër është e mundur të merret një spektër i plotë masiv i përbërjeve dhe një matje e saktë e masave deri në 0.0001 a.m.u.

Kombinimi i një spektometri masive të kohës së fluturimit me kromatografinë e gazit siguron ndarje të mirë të komponentëve të përzierjeve komplekse dhe kufij të ulët zbulimi.

1.2.2 Kromatografia e lëngshme

Kromatografia e lëngshme (LC) është një metodë për ndarjen dhe analizën e substancave komplekse, në të cilën një lëng shërben si fazë e lëvizshme. Nga njëra anë, faza e lëvizshme kryen një funksion transporti, d.m.th. transferon substancën jo të absorbueshme, dhe nga ana tjetër rregullon konstantet e ekuilibrit dhe, rrjedhimisht, mbajtjen si rezultat i bashkëveprimit me fazën stacionare dhe me molekulat e substancave që ndahen.

Në LC, ndarjet më së shpeshti ndodhin në temperaturën e dhomës. Mostra e analizuar injektohet në kolonë dhe eluenti kalon nëpër të. Në LC, natyra e fazës së lëvizshme është thelbësore. Për shkak të kësaj, kombinime të ndryshme edhe të një numri të vogël fazash stacionare dhe një numri të madh fazash të lëvizshme bëjnë të mundur zgjidhjen e problemeve të ndryshme analitike.

Analiza në kromatografinë klasike të lëngshme kryhet për një kohë të gjatë, pasi shkalla e ushqimit të mostrës është e ulët. Kjo metodë është e përshtatshme për ndarjen paraprake të përbërësve të një përzierjeje. Në shumicën e rasteve përdoret HPLC. Transferimi i shpejtë i masës me efikasitet të lartë të ndarjes lejon HPLC të përcaktojë molekulat, makromolekulat dhe jonet. Dallimet midis LC klasike dhe HPLC janë paraqitur në Tabelën 1.3.

Tabela 1.3 Dallimet eksperimentale midis LC klasike dhe asaj të lartë

Karakteristike	LC klasike	HPLC
Presioni, atm	Nga fraksionet e atm. deri në 2 atm.
Shpejtësia e rrjedhjes, mm/min
Kohëzgjatja e ndarjes	Nga disa orë në disa ditë	Disa minuta deri në disa orë
Pajisjet	Altoparlant dhe aksesorë	Kromatograf
Lloji i ndarjes	Ndarja përgatitore	Ndarja analitike
Zbulim	Zbulimi i individit thyesat me metoda analitike	Me një detektor
Sasia e substancës testuese	Nga disa mikrogramë në disa kg	Disa ng deri në disa mikrogramë

HPLC është një metodë kromatografie me kolonë në të cilën faza e lëvizshme është një lëng që lëviz nëpër një kolonë kromatografike të mbushur me një fazë stacionare (sorbent). Kolonat për HPLC karakterizohen nga rezistencë e lartë hidraulike në hyrje.

Në varësi të mekanizmit të ndarjes së substancave, dallohen opsionet e mëposhtme të HPLC:

a) shpërndarja;

b) shkëmbimi i joneve;

c) ekskluzive;

d) kirale;

e) adsorbimi.

Kromatografia e ndarjes bazohet në shpërndarjen e një substance midis dy lëngjeve të papërziershme, të ngjashme me nxjerrjen e përsëritur. Kur kalon një fazë të lëvizshme të lëngshme, ndarja ndodh për shkak të tretshmërisë së ndryshme të përbërësve të përzierjes në fazën e palëvizshme të lëngshme.

Në kromatografinë e shkëmbimit të joneve, molekulat e një përzierje substancash, të shpërbëra në tretësirë në katione dhe anione, ndahen kur lëvizin nëpër sorbent për shkak të forcave të ndryshme të ndërveprimit midis joneve që përcaktohen dhe grupeve jonike të sorbentit.

Në kromatografinë e përjashtimit të madhësisë, molekulat e substancave ndahen sipas madhësisë për shkak të aftësisë së tyre të ndryshme për të depërtuar në poret e fazës stacionare. Në këtë rast, molekulat më të mëdha që mund të depërtojnë në numrin minimal të poreve të fazës stacionare janë të parat që largohen nga kolona, dhe substancat me madhësi të vogla molekulare janë të fundit që largohen.

Në kromatografinë kirale, komponimet optikisht aktive ndahen në enantiomere individualë (izomerë pasqyrë).

Në kromatografinë adsorbuese, substancat ndahen për shkak të aftësisë së tyre të ndryshme për t'u absorbuar dhe desorbuar nga sipërfaqja e një sorbent me një sipërfaqe të zhvilluar.

Në varësi të polaritetit të fazave të lëvizshme dhe të palëvizshme, kromatografia e adsorbimit ndahet në kromatografi me fazë normale (NPC) dhe në fazë të kundërt (RPC).

NPC përdor një adsorbent polar dhe një fazë të lëvizshme jopolare, ndërsa RPC përdor një adsorbent jopolar dhe një fazë të lëvizshme polare.

Megjithëse kromatografia e lëngshme është një metodë për ndarjen e një kampioni në përbërës, një kromatograf modern i lëngshëm përfshin jo vetëm një sistem ndarjeje, por edhe një sistem për matjen sasiore të përmbajtjes së secilit komponent, d.m.th. sistemi i zbulimit. Skema e kromatografit është paraqitur në figurën 1.3.

hidrokarbur me kromatografi të lëngët benzapiren

Figura 1.3 Skema e një kromatografi të lëngët

1 - pompë për furnizimin e fazës së lëvizshme përmes kolonës

2 - shpërndarës për futjen e mostrës në kolonë

3 - kolona ndarëse

4 - detektor - një pajisje për marrjen e një sinjali analitik

5 - sistemi i përpunimit - konverteri analitik i sinjalit në një formë të përshtatshme për perceptimin njerëzor

Për të regjistruar një sinjal analitik, siç u përmend më herët, përdoren detektorë. Në LC përdoren metoda të ndryshme zbulimi. Disa prej tyre janë diskutuar në tabelën 1.4.

Tabela 1.4 Detektorët në kromatografinë e lëngët

Emri i detektorit	Parimi i funksionimit
Spektrofotometrike	Gjatë procesit të elucionit, dendësia optike e eluatit matet në një gjatësi vale të caktuar
Fluorimetrike	Rrezatimi fluoreshent i absorbuar
Emri i detektorit	Parimi i funksionimit

Refraktometrike	Përcaktimi i përqendrimit të një substance në varësi të indeksit të thyerjes të ndryshme nga indeksi i thyerjes së fazës së lëvizshme
Detektor avullues i dritës lazer	Parimi i funksionimit bazohet në ndryshimin në presionet e avullit të tretësve kromatografikë që përbëjnë fazën e lëvizshme dhe substancave të analizuara.

Në HPLC, një detektor fluorimetrik përdoret për të përcaktuar BP, i cili është selektiv në lidhje me benzapiren dhe ka ndjeshmëri të lartë. Parimi i funksionimit të një detektori të tillë bazohet në matjen e emetimit fluoreshente të dritës së absorbuar. Matjet kryhen kryesisht në rajonin UV në gjatësinë e valës së përthithjes maksimale për një grup të caktuar substancash. Gjatësia e valës së rrezatimit fluoreshent është gjithmonë më e madhe se gjatësia e valës së dritës së absorbuar. Për shkak të faktit se zbulimi kryhet nga intensiteti zero, detektorët fluorimetrikë janë më të ndjeshëm se detektorët e përthithjes.

Kombinimi i HPLC me një detektor spektroskopik masiv nuk është përdorur në përcaktimin e benzapirenit. Kjo për faktin se kërkesa të larta vendosen për pastërtinë e ekstrakteve, d.m.th. kohëzgjatja e analizës rritet për shkak të përgatitjes së mundimshme të kampionit. Përveç kësaj, pajisjet janë mjaft të shtrenjta dhe jo mjaftueshëm selektive dhe të ndjeshme.

1.3 Përcaktimi i benz(a)pirenit në ujë me HPLC

1.3.1 Instrumentet matëse, pajisjet ndihmëse, reagentët

Për matje, përdoret një kromatograf Agilent 1200 HPLC (Fig. 1.4) me një detektor fluorimetrik, i cili siguron një gamë të gjatësisë valore të ngacmimit në intervalin 270-365 nm dhe regjistrimin e fluoreshencës në intervalin 390-460 nm.

Figura 1.4 Agilent 1200 HPLC

Kolona kromatografike është e mbushur me një sorbent për OFC. Në kushtet e eksperimentit, efikasiteti i kolonës duhet të jetë së paku 5000 pllaka teorike.

Për përgatitjen e mostrës, përdoret një gyp ndarës me kapacitet 2000 cm 3, një avullues rrotullues, një banjë uji, një pompë uji, n-heksan, klorur dhe sulfat natriumi dhe acetonitril.

Për përgatitjen e tretësirave të kalibrimit, balonat me kapacitet 25 dhe 50 cm 3 dhe pipeta të shkallëzuara me kapacitet 1, 2, 5 cm 3, një tretësirë benz(a)pireni me përqendrim c = 1,0 μg/cm 3 dhe përdoret acetonitrili.

1.3.2 Përgatitja e mostrës

Ekstraktimi i lëngshëm-lëng (LLE) përdoret për nxjerrjen e benzo(a)pirenit nga uji. Ekstraktohet benzo(a)pireni me n-heksan. Për këtë qëllim, uji i përzgjedhur me vëllim 1000 cm 3 futet në një gyp ndarës me kapacitet 2000 cm 3 dhe 25-30 cm 3 n-heksan dhe 20 cm 3 klorur natriumi (NaCl) me përqendrim prej c=0, shtohen 25 g/cm 3 dhe kryhet ekstraktimi duke tundur përzierjen për 10-15 minuta. Pas kësaj, shtresa ujore ndahet dhe nxjerrja kryhet dy herë të tjera pa shtuar NaCl. Pasi ekstraktet bashkohen dhe thahen, duke kaluar nëpër një desikant, i cili është një gyp me një shtresë sulfate natriumi të paktën 2 cm të lartë.Si ekstraktues mund të përdoret diklorometani me të njëjtin vëllim si n-hekzani.

Pas nxjerrjes, ekstrakti avullohet në një vëllim prej 3 - 5 cm 3 në një avullues rrotullues - një pajisje për heqjen e shpejtë të lëngjeve me distilim nën presion të reduktuar. Mbetja transferohet në një epruvetë me kapacitet 10 - 15 cm 3 dhe shtohet n-heksan, pas së cilës tretësira avullohet deri në tharje në një vakum të një pompe uji, duke e vendosur epruvetën në një banjë uji në një temperaturë prej 40 - 50 ° C. Mbetja shpërndahet në 0,2 - 0,5 cm 3 acetonitril. Koncentrati që rezulton mbahet për të paktën 15 minuta.

1.3.3 Diplomimi

Diplomimi kryhet sipas 5 solucioneve standarde me përqendrim 0,002; 0,01; 0,02; 0,05 dhe 0,1 µg/cm3. Përgatitja e solucioneve të kalibrimit është përshkruar në tabelën 1.5.

Tabela 1.5 Përgatitja e solucioneve të kalibrimit

	s, µg/cm3	c0, µg/cm3

Tretësirat janë bërë deri në shenjë me acetonitril.

Të paktën dy kromatograme regjistrohen për secilën nga tretësirat. Figura 1.5 tregon një kromatogram të benzo(a)pirenit me një përqendrim prej 0,002 µg/cm3.

Figura 1.5 Kromatograma e benzit (a) pirenit me përqendrim 0,002 μg / cm 3

Mospërputhja midis zonave të marra duhet të jetë jo më shumë se 7% e mesatares së tyre aritmetike.

Bazuar në të dhënat e marra, ndërtohet një grafik kalibrimi (Fig. 1.6) në formën e një varësie të zonës së pikut nga përqendrimi i masës. Kurba e kalibrimit duhet të jetë lineare. Për çdo tretësirë, devijimi i përqendrimit në masë të matur sipas karakteristikës së kalibrimit nga vlera e specifikuar nuk duhet të kalojë 12%. Nëse devijimi tejkalon vlerën e specifikuar, atëherë kalibrimi përsëritet. Kalibrimi kryhet jo vetëm para matjeve, por edhe pas zëvendësimit të kolonës ose gjatë punës së mirëmbajtjes së kromatografit.

Figura 1.6 Varësia e kalibrimit të zonës së pikut nga përqendrimi i benzo(a)pirenit (r 2 = 0,998)

1.3.4 Kryerja e analizës HPLC

Përcaktimi kromatografik i benzapirenit kryhet në një kolonë Agilent 1200 HPLC, efikasiteti i kolonës duhet të jetë së paku 5000 pllaka teorike bazuar në pikun e benzapirenit. Diametri i brendshëm i kolonës është 2 mm. Kolona është e mbushur me një sorbent me fazë të kundërt (RPS). Në këtë përkufizim, është përdorur një kolonë paraprake që kryen një funksion mbrojtës. Diametri i brendshëm i parakolonës është 2 mm; ajo është e mbushur me të njëjtin OFS.

Si OFS, përdoren sorbentë me faza të lidhura të marra në bazë të xhelit silicë. Në këtë përkufizim, si sorbentë u përdorën oktadecil silicë xhel (C 18) me madhësi grimcash 5 μm dhe polistiren mikroporoz hidrofobik hiperlidhës me një diametër grimcash 3,2 μm dhe një diametër mesatar pore 20–40 E. Ky sorbent është kimikisht i qëndrueshëm në pH = 2-7. Efikasiteti i ndarjes sigurohet nga sipërfaqja e lartë e grimcave të sorbentit, si dhe uniformiteti i përbërjes së sorbentit dhe paketimi i dendur uniform. Faktori i kapacitetit (k) i një sorbent të tillë është 9.86.

Faza e lëvizshme është një përzierje e acetonitrilit - ujit. Përgatitni eluentin në një raport vëllimi 8:2. Në enë qelqi me kapacitet 1000 cm 3 shtoni 200 cm 3 ujë dhe sillni në shenjë me acetonitril. Menjëherë para përdorimit, eluenti mbahet për degazim për të paktën 4 orë. Për shkarkim më të shpejtë, kontejneri me eluentin evakuohet duke e lidhur atë me një pompë uji dhe duke e vendosur në një banjë tejzanor. Eluenti furnizohet nga një valvul dozimi me unazë (injektor) me një vëllim laku prej 10 mm 3, shpejtësia e rrjedhës së fazës së lëvizshme është 200 mm 3 /min.

Në këto kushte, kromatografia zgjat 20-30 minuta.

1.3.5 Regjistrimi dhe përpunimi i rezultateve

Benzopireni zbulohet duke përdorur një detektor fluoreshent. Rekomandohet regjistrimi i kromatogramit në gjatësinë e valës së ngacmimit l ex = 365 nm dhe regjistrin e gjatësisë valore të regjistrimit l. = 400 - 460 nm.

Për të rritur ndjeshmërinë në këtë teknikë, u programuan gjatësitë e valëve të ngacmimit dhe emetimit nga fluoreshenca. Mënyra e programimit tregohet në tabelën 1. 6.

Tabela 1.6 Mënyra e programimit kur përdorni një detektor fluoreshent

Kromatogrami i marrë nga analiza e ujit është paraqitur në figurën 1.7.

Figura 1.7 Kromatogrami i përmbajtjes së PB në ujë

Piku i benzapirenit përcaktohet nga koha e mbajtjes, sepse kjo është një karakteristikë cilësore e benzo(a)pirenit. Për të përcaktuar sasinë e përmbajtjes së benzo(a)pirenit, llogaritet sipërfaqja e pikut. Më pas, sipas grafikut të kalibrimit, gjendet përqendrimi i tij.

Nëse përqendrimi i benzo(a)pirenit tejkalon përqendrimin maksimal të tretësirës standarde, atëherë tretësira e analizuar hollohet dhe kampioni analizohet sërish.

Ndjeshmëria e përcaktimit të benzapirenit me këtë metodë është 0,01 µg/DM3.

1.4 Përcaktimi i benz(a)pirenit në ujë me GC

1.4.1 Marrja e mostrave dhe përgatitja

Një pjesë e rëndësishme e analizës është përzgjedhja dhe përgatitja e kampionit. Uji merret disa herë me një interval prej disa ditësh. Pas kësaj, uji filtrohet dhe merret një mostër prej 0,5 litrash. Klorur natriumi shtohet në mostër dhe ruhet në frigorifer jo më shumë se një ditë.

Për të marrë të dhëna të besueshme, BP nxirret nga kampioni me metodën LLE. Ekstraktuesi është dietil eteri. Nxjerrja kryhet tre herë. Dy herët e para substanca nxirret në një vëllim prej 50 ml të ekstraktuesit. Për herë të tretë, vëllimi i ekstraktuesit është 30 ml. Të gjitha ekstraktet kombinohen dhe avullohen në një avullues rrotullues derisa eteri të hiqet plotësisht. Mostra që rezulton tretet në 2 ml benzen.

Përpara përcaktimit sasior të BP, përbërësit e përzierjes ndahen me kromatografi me shtresë të hollë (TLC).

TLC është një metodë kromatografike e bazuar në përdorimin e një shtrese të hollë adsorbent si një fazë stacionare.

Përpara ndarjes, pjata zhytet në një solucion 4% të kafeinës në kloroform dhe aktivizohet në furrë në temperaturën 100 ° C. Për të hequr papastërtitë nga pllaka, pasi të ftohet, lahet me kloroform dhe aktivizohet përsëri në furre per 30 minuta ne temperaturen 100 rreth S.

Mostrat e tretura në benzen vendosen në një pjatë dhe kromatografohen. Agjenti eluent është një përzierje e cikloheksanit - n-heksanit, në një raport vëllimi 16:1.

1.4.2 Kuantifikimi

Analiza sasiore sipas kësaj metode kryhet me kromatografi gaz-lëng me një detektor të jonizimit të flakës. Për analizë është përdorur një kromatograf "Tsvet - 500" (Fig. 1.8) me një detektor jonizimi të flakës.

Figura 1.8 Kromatograf me gaz "Ngjyrë - 500"

Gazi mbartës për këtë përcaktim ishte azoti. Azoti furnizohej me një shpejtësi rrjedhjeje prej 3 ml/min. Për analizë është përdorur një kolonë kuarci kapilar me përmasa 25 m × 0.32 mm. Si fazë stacionare u përdor vaji metil silikoni OV-101 me trashësi filmi 0.4 μm. Analiza u krye në modalitetin e programimit të temperaturës nga 210 në 300°C me një shpejtësi prej 4°C/min. Një mostër 1 μL u injektua duke përdorur një mikroshiringë.

Figura 1.9 tregon kromatogramin BP të marrë me këtë metodë.

Figura 1.9 Kromatogrami i BP i marrë nga GC (3-BP)

Në mënyrë cilësore, BP u përcaktua nga koha e mbajtjes, krahasuar me kohën e mbajtjes së mostrës standarde, e cila ishte 28 minuta.

Në mënyrë sasiore, BP përcaktohet me metodën e standardit të jashtëm. Për ta bërë këtë, ndërtoni një grafik kalibrimi për disa mostra standarde me një gamë përqendrimi 1-20 ng/ml. Lartësia e pikut është përdorur si një sinjal analitik.

Benz (a) pireni është një kancerogjen i klasës së parë të rrezikut në lidhje me PAH. Mund të gjendet në tokë, ujë, ajër, ushqim dhe kur hyn në trup, grumbullohet. Prandaj, përcaktimi i tij në objekte të ndryshme është prioritet.

MPC për BP është mjaft e ulët, kështu që përdoren metoda të ndjeshme për ta përcaktuar atë. Vështirësia e përcaktimit të tij qëndron edhe në faktin se, përveç BP, kampioni mund të përmbajë izomerët e tij, si benz(e)pireni dhe peryleni, koha e mbajtjes së të cilëve është pothuajse e njëjtë me atë të BP. Pra, prania e izomerëve e bën të vështirë identifikimin e substancës. Ky problem zgjidhet duke ndarë fillimisht përzierjen me TLC, si dhe duke përdorur mostra standarde të BP.

Në këtë punim të kursit, u konsideruan disa metoda kromatografike që janë të përshtatshme për përcaktimin e benzo (a) pirenit. Pas një pune paraprake me literaturën, u justifikua zgjedhja e metodave për përcaktimin sasior të saj. Në bazë të metodës janë përzgjedhur metodat dhe janë paraqitur kromatogramet e marra me këto metoda.

BIBLIOGRAFI

1. Traven VF Kimi organike. Libër mësuesi për universitetet: në 3 vëllime / VF Traven - M .: BINOM. Laboratori i njohurive, 2013. --. - T. 2. - 2013. - 517 f.

2. Grechishcheva N. Yu. Ndërveprimi i acideve humike me hidrokarburet aromatike polinukleare: aspekte kimike dhe toksikologjike: disertacion për gradën Doktor i Kimisë. Shkenca: 02.00.13 / N. Yu. Grechishcheva. - M., 2000. - 157 f.

3. Pat. 2466406 Federata Ruse. Metodat për përcaktimin sasior të benzo (a) pirenit në urinë me anë të kromatografisë së lëngët / Zaitseva N. V., Ulanova T. S., Kornazhitskaya T. D., Kislitsina A. V., Pshenichnikova E. O., Permyakova T. S. -201114;250114; dhjetor 20.10.11; publikim. 10.11.12, Bul. nr 31.

4. Përqendrimet maksimale të lejuara (MPC) të kimikateve: GN 2.1.7.2041-06. -- [E prezantuar 2006-02-07]. - M.: Standartinform, 2006. - 7 f.

5. Tsimbalyuk K. K. Përcaktimi i hidrokarbureve aromatike policiklike (PAH) në objektet mjedisore (Rishikim) / K. K. Tsimbalyuk, Yu. M. Denga, V. P. Antonovich // Metodat dhe objektet e analizës kimike. - 2013. - T. 8, nr. 2. - S. 50 - 62.

6. Yu. A. Zolotov, Bazat e kimisë analitike. Çështje të përgjithshme. Metodat e ndarjes: në 2 libra. / Yu. A. Zolotov, E. N. Dorokhova, V. I. Fadeeva dhe të tjerë. Ed. Yu. A. Zolotova. -- M.: Më e lartë. Shk., 2002. --. -- Princi. 1. - 2002. - 351 f.

7. Tsarev N. I. Kromatografia praktike me gaz. Mjete mësimore për studentët e Fakultetit të Kimisë në lëndën speciale "Metodat e analizës gazkromatografike" / N. I. Tsarev, V. I. Tsarev, I. B. Katrakov. - Barnaul.: Shtëpia botuese e Universitetit Shtetëror Altai, 2000. - 156 f.

8. Drugov Yu. S. Analiza kromatografike e gazit e ajrit të ndotur / Yu. S. Drugov, A. A. Rodin. -- M.: BINOM. Laboratori i Dijes, 2015. -- 531 f.

9. Styskin E. L. Kromatografi e lëngshme praktike me performancë të lartë / E. L. Styskin, L. B. Itsikson, E. V. Braude. -- M.: Kimi, 1986. -- 210 f.

10. Dmitrikov V. P., Larionov O. G., Nabivach V. M. Analiza e hidrokarbureve aromatike policiklike me anë të kromatografisë së lëngshme me performancë të lartë // Uspekhi khimii. - 1986. - T. 2, nr 4. - S. 679 -700.

11. Uji i pijshëm. Metoda për përcaktimin e përmbajtjes së benzo(a)pirenit: GOST 31860 - 2012. -- [E prezantuar 2014-01-01]. - M.: Standartinform, 2014. - 11 f. -- (Standardi ndërshtetëror).

12. Borsch N. A. Përcaktimi i benzapirenit me kromatografi të lëngshme me performancë të lartë / N. A. Borsch, S. V. Sidorenko // Tendencat moderne në zhvillimin e shkencës dhe teknologjisë. - 2016. - V. 1, nr. 2. - S.37 - 41.

13. Proskurina N. A. Përcaktimi i hidrokarbureve aromatike polinukleare në produktet ushqimore që përmbajnë yndyrë duke përdorur nxjerrjen në fazë të ngurtë / N. A. Proskurina, V. A. Davankov, M. M. Ilyin // Procesi i marrjes dhe kromatografisë. - 2009. - T. 9, nr. 2. - S. 167 - 176.

14. Nazarkina S. G. Nazarkina S. G., Purygin P. P., Bulanova A. V., Larionov O. G. Kromatografia e gazit kapilar në kontrollin ekologjik të ujit të shkrirë // Vestnik SamGU. - 2000. - T. 2, . -- S. 152 -156.

Organizuar në Allbest.ru

...

Dokumente të ngjashme

Hidrokarburet aromatike: karakteristikat e përgjithshme. Nomenklatura dhe izomeria, vetitë fizike dhe kimike të hidrokarbureve aromatike. Mekanizmi i reaksioneve të zëvendësimit elektrofilik dhe nukleofilik në serinë aromatike. Përdorimi i areneve, toksiciteti i tyre.

abstrakt, shtuar 12/11/2011

Informacione të përgjithshme për klorurin vinil - një gaz pa ngjyrë, një helm i fortë që ka një efekt mutagjen, kancerogjen dhe teratogjen. Historia e zbulimit të klorurit të vinilit, vetitë e tij kimike dhe metodat e prodhimit. Hidroklorinimi katalitik i acetilenit në fazën e gazit.

prezantim, shtuar 08/10/2015

Klasifikimi i aldehideve, struktura, paraqitja në natyrë, veprimi biologjik, aplikimi. Nomenklatura e ketoneve, historia e zbulimit, vetitë fizike dhe kimike. Reaksionet e shtimit nukleofilik. Metodat kimike për identifikimin e aldehideve.

prezantim, shtuar më 13.05.2014

Vetitë e ujit dhe metodat e zbutjes së tij. Kërkesat për fortësinë e ujit të konsumuar në prodhimin e nxehtësisë dhe energjisë. Bazat teorike dhe metodat për përcaktimin e fortësisë së ujit me metodën kompleksometrike. Marrja e mostrave, reagentët, përcaktimi.

punim afatshkurtër, shtuar 10/07/2009

Koncepti dhe nomenklatura e fenoleve, vetitë themelore fizike dhe kimike të tyre, reaksionet karakteristike. Metodat për marrjen e fenoleve dhe shtrirja e zbatimit të tyre praktik. Vetitë toksike të fenolit dhe natyra e ndikimit të tij negativ në trupin e njeriut.

punim afatshkurtër, shtuar 16.03.2011

Historia e zbulimit të aspartamit, vetitë e tij. Metoda për përcaktimin e aspartamit, pajisjeve, instrumenteve dhe reagentëve. Aspartame në trupin e njeriut. Studimet toksikologjike dhe klinike të aspartamit. Konsumimi i ushqimeve që përmbajnë aminoacidin fenilalaninë.

abstrakt, shtuar 04.10.2011

Efekti toksik i fenolit dhe formaldehidit në organizmat e gjallë, metoda për përcaktimin cilësor të tyre. Përcaktimi sasior i fenolit në mostrat e ujërave natyrore. Metoda për përcaktimin e përqendrimeve minimale të zbulimit të toksikanëve organikë në ujë.

punim afatshkurtër, shtuar 20.05.2013

Struktura kimike, vetitë dhe rëndësia biologjike e vitaminës C. Nevoja ditore për të. Përcaktimi eksperimental jodometrik, metodat sasiore dhe kimike për analizën e përmbajtjes së vitaminave në produktet ushqimore dhe preparatet e vitaminave.

punim afatshkurtër, shtuar 18.03.2013

Karakteristikat e përgjithshme dhe vetitë kimike kryesore të derivateve aromatike të acetamino. Metodat për përcaktimin e autenticitetit të derivateve aromatike të acetaminës. Përdorimi i derivateve të acetamino në farmakologji dhe efekti i tyre në trupin e njeriut.

punim afatshkurtër, shtuar 11/11/2009

Karakteristikat e zakonshme në strukturën e molekulave të alkooleve monohidrike dhe polihidrike. vetitë e alkoolit etilik. Efekti i alkoolit në trupin e njeriut. Krijimi i një korrespondence midis materialeve fillestare dhe produkteve të reagimit. Vetitë kimike të alkooleve polihidrike.

faqe 1

faqe 2

faqe 3

faqe 4

faqe 5

faqe 6

faqe 7

faqe 8

faqe 9

faqe 10

faqe 11

faqe 12

faqe 13

faqe 14

faqe 15

faqe 16

faqe 17

faqe 18

faqe 19

GOST 24104.

Avullues rrotullues IR-1M.

GOST 25336.

Uji i banjës.

Përzierëse magnetike e tipit MM-ZM me ngrohje elektrike.

Ndriçues ultravjollcë kromatoskopi me një gamë spektrale 250 - 700 nm dhe një llambë BUV-15 si burim i rrezatimit UV.

Dhomë qelqi kromatografike 40 x 40 x 40 cm.

Pllaka qelqi për kromatografi me shtresë të hollë 5 x 20 dhe 20 x 20 cm.

Një kolonë kromatografike xhami 500 mm e gjatë dhe 20 mm në diametër me një skaj të tërhequr në fund dhe një rezervuar me kapacitet 50 - 60 cm 3 ПШ 14/23.

Frigoriferi ХПТ-2-400-29/32 ХС ose ХШ-1-400-29/32 ХС sipas GOST 25336.

Krahas tipit AIO-14/23-50 TS ose AIO-14/23-14/23-65 TS sipas GOST 25336.

Vizitor matës me ndarje peshore 0.1 cm GOST 427.

Dephlegmator 250-19/26-29/32 TC ose 300-19/26-29/32 sipas GOST 25336.

Gryka П-1-19/26-14/23-14/23 ТС ose Н-2-19/26-14/23 ТС sipas GOST 25336.

GOST 25336.

GOST 25336. Cilindrat e graduar 1-100, 1-250 ose 3-100, 3-250 GOST 25336.

Xhami kimik B-1-100 ose B-1-150 sipas GOST 25336.

Balonat K-1-100-29/32 THS, K-1-25R-29/32 THS, K-1-500-29/32 THS ose P-1-500-29/32 THS sipas GOST 25336.

Hinkë Buchner 1 ose 2 ose 3 GOST 9147.

Kupat për peshimin (kutitë) SV-14/8 ose SV-19/9, ose SV-24/10, ose SV-34/12 sipas GOST 25336.

Mikroshiringa të tipit MSH-10, kapilarë qelqi.

Treguesi i letrës universale.

Letër filtri për laborator GOST 12026.

Bisturi ose shpatull i hollë.

Alkooli etilik i korrigjuar sipas GOST R 51652 ose alkool etilik i korrigjuar, nota teknike GOST 18300.

Acetonitrili sipas dokumentit normativ.

Pluhur mikrokristaline celuloze sipas dokumentit normativ.

GOST R 51650-2000

Benz (v) kriseni, përmbajtja e substancës kryesore është jo më pak se 98%.

Sephadex LH-20.

Xhel silicë e markës ASKG sipas dokumentit normativ.

Lejohet përdorimi i instrumenteve të tjera matëse me karakteristika metrologjike dhe pajisje me karakteristika teknike, si dhe reagentë dhe materiale me cilësi jo më të ulët se sa më sipër.

5.2 Përgatitja për testin

5.2.1 Përgatitja e tretësve

Tretësit (n.heksan, alkool etilik, aceton, benzen) distilohen në mënyrën e zakonshme me një kondensator refluks.

Dimetilformamidi distilohet duke shtuar 120 cm 3 benzen dhe 36 cm 3 ujë për 1 dm 3 tretës në një balonë distilimi.

5.2.2 Përgatitja e acetatit të celulozës

(50,0 ± 2,0) g celulozë mikrokristaline vendoset në një balonë me fund të sheshtë me kapacitet 500 cm 3, një përzierje prej 150 cm 3 benzen ose toluen, 70 cm 3 anhidrid acetik dhe 0,3 cm 3 acid sulfurik të përgatitur në një enë të veçantë shtohet. Përzierja e reaksionit përzihet me një përzierës magnetik për 6 - 8 orë, lihet pa u përzier edhe për 18 orë të tjera, pas së cilës faza e lëngshme derdhet dhe mbetja derdhet në 300 cm 3 alkool etilik, përzihet, lihet në alkool për 24 orë, pastaj celuloza filtrohet në një hinkë Buchner, lahet me 100 cm 3 alkool etilik dhe ujë të distiluar derisa larjet të jenë neutrale (sipas letrës treguese).

Më pas kontrolloni aktivitetin kromatografik të celulozës së acetiluar. Për ta bërë këtë, 3-4 orë para analizës, përgatitet një përzierje e alkoolit etilik, acetonit dhe ujit të marrë në raport vëllimi 60:25:15 dhe derdhet në një dhomë kromatografike të veshur me shirita letre filtri. Lartësia e shtresës së tretësit duhet të jetë 1,5-2 cm kapilar deri në një pikë prej 5 μl të një tretësire të benzo (a) pirenit me një përqendrim në masë 1 μg / cm 3. Pllaka vendoset në dhomën kromatografike dhe lihet në dhomë derisa niveli i tretësit të rritet me të paktën 100 mm nga vija e fillimit. Në fund të kromatografisë, pllaka hiqet, thahet në ajër dhe nën llambën e një rrezatuesi ultravjollcë, vihet re një njollë blu fluoreshente e benzo(a)pirenit. Matni distancën nga vija e nisjes në pjesën e përparme të tretësit dhe në mes të pikës së benzo(a)pirenit; llogaritni vlerën e Rj, e cila vlerëson shpejtësinë e lëvizjes së benzo(a)pirenit në pllakë, sipas formulës:

ku XBP është distanca nga vija e nisjes deri në mes të pikës së benzo(a)pirenit, mm;

L është distanca nga vija e fillimit në pjesën e përparme të tretësit, mm.

Vlera Rj e benzo(a)pirenit duhet të jetë 0.1.

Për të përgatitur një pjatë pune, 5 g celulozë të acetiluar pezullohen në 20 cm 3 alkool etilik dhe derdhen në një shtresë të barabartë në një pjatë 20x20 cm.

5.2.3 Përgatitja e tretësirave standarde të benzo(a)pirenit dhe benzo(b)krizenit

(10,0+0,2) mg benzo(a)piren dhe benzo(b)krizen peshohen në gota peshimi (qese shishe). Mostrat transferohen në mënyrë sasiore në balona vëllimore me kapacitet 100 cm 3: benz(a)piren-benzen, benzo(c)krizen-acetonitril, pastaj vëllimi i tretësirës së benz(a)pirenit rregullohet në shenjën me benzen, vëllimi i tretësirës është benz(c)krizen-acetonitril. Tretësirat që rezultojnë kanë një përqendrim masiv prej 100 μg/cm 3 . Zgjidhjet ruhen në një vend të ftohtë të errët për jo më shumë se tre muaj.

5.2.4 Përgatitja e tretësirave të punës të benzo(a)pirenit dhe benzo(b)krizenit

Tretësirat e punës përgatiten duke holluar tretësirat standarde duke përdorur pipeta me kapacitet 1, 5 dhe 10 cm 3 dhe balona vëllimore me kapacitet 100 cm 3, vëllimi i tretësirës rregullohet në shenjë me tretësin e duhur, përzihet dhe ruhet. në një vend të ftohtë të errët për jo më shumë se një muaj.

Përgatitja e tretësirës së benzo(a)pirenit me përqendrim masiv 1,0 μg/cm 3 (përcaktohet me spektrofluorimetri): Nga tretësira standarde merret 1,0 cm 3 dhe transferohet në një balonë vëllimore me kapacitet 100 cm 3. ; Vëllimi i tretësirës u rregullua në shenjën me benzen.

Përgatitja e tretësirës së benz(a)pirenit me përqendrim masiv 0,25: 1,0 dhe 5,0 μg/cm 3 (përcaktohet me kromatografi të lëngët me performancë të lartë): Nga tretësira standarde merret 0,25; 1.0; 5,0 cm 3 , përkatësisht, dhe të transferuara në balona vëllimore me kapacitet 100 cm 3 ; vëllimi i tretësirave u rregullua në shenjë me acetonitril.

Përgatitja e tretësirave të benzo(b)krizenit me përqendrim masiv 0,5 dhe 10 µg/cm 3 : nga tretësira standarde merren respektivisht 0,5 dhe 10 cm 3 dhe transferohen në balona vëllimore me kapacitet 100 cm 3 ; Vëllimi i secilës tretësirë u arrit deri në pikën me acetonitril.

5.2.5 Përgatitja e solucioneve të kalibrimit

Për të përgatitur tretësirat e kalibrimit të një përzierjeje të benzo (a) pirenit dhe benzo (b) krizenit, vëllimet e tretësirës standarde të benzo (a) pirenit me një përqendrim në masë 100 μg / cm 3 dhe punimin e një tretësire të benzo( b)përqendrimi i masës së krizenit prej 10 μg/cm 3, sillni vëllimin në shenjë me acetonitril. Tretësirat që rezultojnë përzihen dhe ruhen në një vend të errët dhe të ftohtë për jo më shumë se një muaj.

tabela 2

zgjidhje	Vëllimi i tretësirës fillestare, cm 3		Përqendrimi masiv në tretësirën e kalibrimit, µg/cm 3
zgjidhje	Benz (a) Përqendrimi në masë i pirenit 100 μg / cm 3	Benz (v) Përqendrimi në masë i krizenit 10 μg / cm 3	Benz(a)piren	Benz(v)kriseni

5.3 Kryerja e testit

5.3.1 Ndarja e benzo(a)pirenit nga produkti

Në një balonë me fund të rrumbullakët ose në një balonë me fund të sheshtë me kapacitet 100 cm 3, vendoset një mostër e produktit me peshë 10 g, një tretësirë e përbërë nga 4 g hidroksid kaliumi në 50 cm 3 alkool etilik 92%. shtuar. Përmbajtja e balonës përzihet me tundje. Balona lidhet me një kondensator refluks dhe nxehet në një banjë uji ose në një përzierës magnetik me përzierjen e reaksionit duke zier për 3 orë.Më pas në balonë përmes frigoriferit shtohen 100 cm 3 ujë të distiluar. Masa e reaksionit ftohet në temperaturën e dhomës. Pas ftohjes, masa e reaksionit transferohet në një gyp ndarës me kapacitet 500 cm 3 . Nëse pas hidrolizës mbetet një mbetje e ngurtë në masën e reaksionit, ajo ndahet në një hinkë Buchner, duke e larë mbetjen në filtër me 30 cm 3 alkool etilik të nxehtë. Për ekstraktim përdoret faza e lëngshme e masës së reaksionit. Në një hinkë ndarëse shtoni 30 cm 3 n.heksan. Përmbajtja e hinkës tundet dhe lihet të ndahen lëngjet. Në rastin e formimit të një emulsioni, përzierjes i shtohen në një gyp ndarës 20 cm 3 alkool etilik. Pas ndarjes, faza e poshtme ujore-alkoolike derdhet në një balonë dhe ekstrakti i heksanit derdhet në një gyp tjetër ndarës. Ky trajtim i masës së reaksionit kryhet edhe dy herë të tjera, duke përdorur 30 cm 3 n-heksan për ekstraktim dhe alkool etilik për të ndarë emulsionin në porcione 20 cm 3 .

Pas përfundimit të ekstraktimit, ekstrakti i kombinuar i heksanit lahet në një gyp ndarës me ujë të distiluar tre herë me 30 cm 3, ekstrakti transferohet në një balonë me fund të rrumbullakët me një kapacitet 100 cm 3, duke filtruar përmes një shtrese anhidri. sulfat natriumi në një gyp me një filtër poroz. Tretësira avullohet në një avullues rrotullues në një vëllim prej 50 cm 3 në një temperaturë banjë uji jo më shumë se 60 °C.

Një ekstrakt i zhveshur transferohet në një gyp ndarës me kapacitet 500 cm 3 dhe i shtohen 50 cm 3 një përzierje dimetilformamide dhe uji, të marra në një raport vëllimi 9:1. Përzierja tundet fuqishëm për 1 min, pas ndarjes në fazë, pjesa e poshtme hidhet në një balonë me fund të sheshtë me kapacitet 200 cm 3 dhe 50 cm 3 nga një përzierje dimetilformamide dhe uji nxirret përsëri nga heksani i sipërm. avokat. Shtresa e heksanit hidhet, ekstrakti i dimetilformamidit i kombinuar në një balonë me fund të sheshtë transferohet në një gyp ndarës, shtohen 100 cm 3 ujë të distiluar dhe nxjerrja nga faza ujore kryhet me heksan tre herë në 50 cm3. Faza ujore hidhet dhe ekstrakti i heksanit lahet me ujë tre herë 30 cm 3, transferohet në një balonë me fund të sheshtë, shtohet 10 g sulfat natriumi anhidrik dhe inkubohet për një orë, n.heksani avullohet në një rrotull. avulluesi në një vëllim 1,5 - 2,0 cm 3, tretësi i mbetur hiqet

GOST R 51650-2000

rrjedha e ajrit përmes një vakumi të lidhur me një pompë uji, mbetja në balonë shpërndahet në 0,5 cm 3 alkool etilik.

Peshoni (2,5 ± 0,2) g Sephadex LH-20 në një gotë me kapacitet 100 cm 3, shtoni 20 cm 3 alkool etilik dhe lëreni të fryhet për 3-4 orë.Më pas xheli transferohet duke e larë me një të vogël. sasia e alkoolit, në një kolonë kromatografike qelqi, lëreni tretësin të kullojë në mënyrë të tillë që shtresa e alkoolit mbi shtresën e sorbentit të mbetet të paktën 2 mm. Pjesa e mbetur e ekstraktit nga balona aplikohet në kolonën e përgatitur me një pipetë, duke e larë atë nga balona tri herë me alkool etilik në pjesë prej 0,5 cm 3 . Elucioni nga një kolonë hidrokarburesh aromatike policiklike, duke përfshirë benzo(a)piren, kryhet me 40 cm 3 etanol, fraksioni i parë prej 12 cm 3 hidhet, fraksioni i dytë prej 25 cm 3 mblidhet. Një shpejtësi e elucionit të tretësit prej 0,5 cc/min sigurohet duke aplikuar një mbipresion të lehtë me një rrymë ajri ose azoti përmes një gryke të lidhur me një ventilator ose shishe gazi. Gazi duhet të furnizohet përmes një tubi xhami të mbushur me xhel silicë.

Kolona me Sephadex LH-20 mund të përdoret në mënyrë të përsëritur. Për ta bërë këtë, duke parandaluar tharjen e sorbentit pas fraksionimit, kolona lahet me 25 cm 3 alkool etilik dhe aplikohet kampioni tjetër.

Tretësira e fraksionit të dytë transferohet në një balonë në formë dardhe me kapacitet 50 cm 3, tretësi avullohet në një vëllim 0,5 - 1,0 cm 3, mbetja e tij hiqet në një rrymë ajri ose azoti.

Fraksioni i përftuar që përmban benzo(a)piren analizohet më tej me anë të kromatografisë së lëngshme me performancë të lartë ose metodës spektrofluorimetrike.

Në të njëjtën kohë, kryhet një eksperiment kontrolli, duke kryer të gjitha fazat e analizës duke përdorur reagentë sipas procedurës, por pa peshuar produktin.

5.3.2 Përcaktimi i benz(a)pirenit me kromatografi të lëngshme me performancë të lartë

5.3.2.1 Kushtet e kromatografisë

Kushtet e kromatografisë zgjidhen në varësi të llojit të kromatografit të lëngët dhe kolonës kromatografike të përdorur.

Si shembull, mund të jepen kushtet e mëposhtme për përcaktimin kromatografik të benzo(a)pirenit.

Kromatograf i lëngshëm AIex-334 me detektor fluoreshent Kratos FS-970.

Kolona Supelcosil LC-PAM, granulimi 5 mikron, gjatësia 150 mm, diametri - 4,6 mm.

Detektor fluorometrik: gjatësia e valës së ngacmimit 300 nm, filtri i emetimit - 418 nm.

Faza e lëvizshme: acetonitrili dhe uji në një raport vëllimor 8:2.

Shpejtësia e elucionit - 2,0 cm 3 /min.

Vëllimi i kampionit të injektuar është 20 µl.

Ndjeshmëria e amplifikatorit zgjidhet në mënyrë që intensiteti i sinjaleve të benzo (a) pirenit dhe standardit të brendshëm - benzo (b) krisenit të mos kalojë 95% të shkallës.

Koha e analizës - 15 min; koha e mbajtjes së benzo(a)pirenit - 5 min, benzo(b)krizenit -13 min.

Tretësirat e analizuara kromatografohen dy herë në të njëjtat kushte. Zonat e majave maten duke përdorur një integrues ose manualisht si produkt i lartësisë së majës dhe gjerësisë së saj në gjysmën e lartësisë.

Përcaktimi i përmbajtjes së benzo(a)pirenit kryhet me metodën e standardit të brendshëm ose me metodën e shtesave.

5.3.2.2 Përcaktimi i përmbajtjes së benzo(a)pirenit në një tretësirë (ekstrakt) të marrë sipas 5.3.1 me metodën e standardit të brendshëm

Kur përdoret kjo metodë e vlerësimit sasior, kromatografi kalibrohet paraprakisht duke përdorur solucione kalibruese të përgatitura sipas 5.2.5.

Në kushtet e specifikuara në 5.3.2.1, regjistroni tre kromatogramë për secilën nga tretësirat e përgatitura dhe matni zonat e pikut të benzo(a)pirenit dhe benzo(b)krizenit. Përcaktoni mesataren aritmetike të sipërfaqes së majave të benzo(a)pirenit dhe benzo(b)krizenit, të llogaritur nga tre kromatograme.

Koeficienti i kalibrimit K llogaritet me formulë

ku dhe dhe 2 janë masat e benzit (a) pirenit (/l]) dhe benzo (b) krisenit (t 2), μg të futura në kromatograf; 5) dhe ^2 - zonat e pikut të benz(a)pirenit (.9]) dhe benzo(b)krizenit (A^), cm3.

Për çdo zgjidhje llogaritet koeficienti i kalibrimit K.

Vlerat e tij nuk duhet të ndryshojnë nga mesatarja aritmetike e faktorit të kalibrimit nga të gjitha rezultatet me më shumë se 10%.

Me një gjatësi vale ngacmimi prej 300 nm dhe një filtër emetimi prej 418 nm, vlera e faktorit të kalibrimit është 9.5.

Para fillimit të analizës në fazën e përgatitjes së mostrave për hidrolizë alkaline, mostrës së produktit dhe kampionit të kontrollit i shtohen 50 μl tretësirë benzo(b)krizeni me përqendrim masiv 0,5 μg/cm 3. Të dy mostrat kalohen nëpër të gjitha hapat e provës të specifikuara në 5.3.1. Mbetja e thatë shpërndahet në 200 µl acetonitril.

Në kushtet e specifikuara në 5.3.2.1, regjistroni kromatogramet e një tretësire të benzit (a) pirenit me një përqendrim në masë 100 μg / cm 3 dhe një tretësirë të benzo (b) krisenit me një përqendrim në masë 100 μg / cm 3. , vini re kohën e lëshimit të benzit (a) pirenit dhe benzit (c) krisenës. Më pas, regjistrohen kromatogramet e kampionit të kontrollit me shtimin e benzo(b)krizenit dhe kampionit të produktit me të njëjtin shtim të benzo(b)krizenit. Matni sipërfaqet e majave të benzo(a)pirenit dhe benzo(b)krizenit në kromatogramet e mostrës së produktit dhe kampionit të kontrollit.

Dy kromatograme regjistrohen për çdo mostër. Nga dy kromatograme, llogaritet mesatarja aritmetike e sipërfaqes së majave të benzo(a)pirenit dhe benzo(b)krisenit.

Në bazë të të dhënave të marra, në kampionin e produktit m\ dhe kampionin e eksperimentit të kontrollit m 2, përcaktohet masa e benzo(a)pirenit, mcg.

“72 është masa e benzo(a)pirenit në kampionin e eksperimentit të kontrollit, mcg; t st është masa e benzo(v)krizenit të futur në mostrën e produktit dhe kampionin e kontrollit, mcg;

S"] dhe S 2 - zonat e pikut të benzo(a)pirenit në kromatogramet e kampionit të produktit (.S"]) dhe kampionit të kontrollit (.S/), cm2;

L/, L/ - zonat e pikut të benz(b)krizenit në kromatogramet e mostrës së produktit (.SS) dhe kampionit të kontrollit (L/), cm 2;

K është faktori i kalibrimit i vendosur sipas 5.3.2.2.

5.3.2.3 Përcaktimi i përmbajtjes së benzo(a)pirenit në një tretësirë (ekstrakt) të marrë sipas 5.3.1 me metodën e shtimit

Për përcaktimin sasior kur përdoret metoda e shtimit, një mostër e eksperimentit të kontrollit analizohet njëkohësisht me një mostër të produktit. Fraksionet e izoluara nga mostrat e produktit dhe kontrolli sipas 5.3.1 treten në 400 µl acetonitril. Tretësirat që rezultojnë ndahen në dy pjesë, duke marrë një pjesë më të vogël (40 µl) në një provëz ose një balonë në formë dardhe.

Regjistroni kromatogramet e mostrave të produktit, mostrat e kontrollit dhe një kromatogramë të një tretësire të benzo(a)pirenit me përqendrim në masë 0,25 μg/cm 3 . Vini re kohën e lëshimit të benzo(a)pirenit.

Në pjesët e mbetura të mostrës së produktit dhe përvojës së kontrollit (360 μl) bëni shtimin e 10 - 20 μl të një tretësire të përqendrimit masiv të benzo(a)pirenit prej 5 μg/cm 3 . Tretësirat që rezultojnë futen sërish në kromatograf.

Të gjitha kromatogramet regjistrohen në dy kopje. Maten zonat e pikut të benzo(a)pirenit. Nga dy kromatograme, llogaritet mesatarja aritmetike e sipërfaqes së pikut të benzo(a)pirenit.

Bazuar në të dhënat e marra, masa e benzo(a)pirenit, μg, përcaktohet në kampionin e produktit /77] dhe kampionin e eksperimentit të kontrollit t 2:

t op ■ S 1 . _ t deri në ■ S 3 (9)

S 2 - 0,95) ' 2 5 4 - 0,95 3'

ku /77 op dhe /77 k është masa e benzo(a)pirenit të shtuar në një pjesë të ekstraktit nga mostra e produktit (t op) dhe kampionit të kontrollit (/%), μg;

S"] dhe S 2 - zonat e pikut të benzo(a)pirenit në kromatogramet e kampionit të produktit (.S"]) dhe kampionit të produktit me shtimin e benzo(a)pirenit (L/), cm 2;

L/ dhe.S) - zonat e pikut të benzo(a)pirenit në kromatogramet e kampionit të eksperimentit të kontrollit (L/) dhe kampionit të eksperimentit të kontrollit me shtimin e benzo(a)pirenit (L/), cm 2;

0.9 është proporcioni i kampionit të cilit i shtohet benz(a)piren.

5.3.3 Përcaktimi i përmbajtjes së benz(a)pirenit me anë të spektrofluorimetrisë në temperaturën e dhomës

Me rastin e përcaktimit të përmbajtjes së benzo(a)pirenit me spektrofluorimetri, njëkohësisht me një kampion të produktit, analizohet një kampion i eksperimentit të kontrollit, në të cilin 50 μl tretësirë të benzo(a)pirenit me përqendrim masiv prej 1 μg. shtohet /cm 3.

Fraksionet që përmbajnë benzo(a)piren të marra sipas 5.3.1 nga kampioni i produktit dhe kampioni i kontrollit me aditivin treten në 0.5 cm 3 benzen dhe më pas i nënshtrohen pastrimit shtesë në një shtresë të hollë celuloze të acetiluar.

Për ta bërë këtë, një pjatë 20 x 20 cm, e përgatitur siç tregohet në 5.2.2, ndahet në dy fusha: një fushë anësore 1,5-2 cm e gjerë dhe një fushë kryesore, duke tërhequr një shirit ndarës mbi shtresën sorbent me një bisturi ose një shpatull i hollë. Një zgjidhje e fraksionit të izoluar sipas 5.3.1 aplikohet në fushën kryesore me një shirit të vazhdueshëm, duke u larguar 2 cm nga buza e poshtme e pllakës dhe 1 cm nga skajet anësore. Zgjidhja aplikohet duke përdorur një kapilar ose mikroshiringë të tërhequr hollë, madhësia e njollave nuk duhet të kalojë 5 mm. Për transferimin sasior të një lënde, ajo lahet dy herë nga muret e balonës me një sasi të vogël benzeni (0,4 - 0,6 cm 3). Në vijën e fillimit të fushës anësore aplikohen në pikë 5 μl tretësirë benzo(a)pireni me përqendrim masiv 1 μg/cm 3. Pas avullimit të plotë të tretësit, pllaka vendoset në një dhomë kromatografike të ngopur paraprakisht në një kënd prej 70° - 85° dhe elucioni kryhet në një përzierje alkooli etilik, acetoni dhe uji, të marrë në një raport prej 60: 25:15. Kur pjesa e përparme e tretësit arrin 2 cm nga buza e sipërme e pllakës, ajo hiqet nga dhoma, thahet në ajër dhe zona kromatografike e benzo(a)pirenit zhvillohet nën një llambë rrezatuese ultravjollcë. Sorbenti nga zona e benzo(a)pirenit nga fusha kryesore gërvishtet nga pllaka duke përdorur një bisturi ose një shpatull të hollë dhe transferohet në një filtër qelqi, nga i cili substanca shpërndahet në disa hapa me 50 cm 3 benzen në balona. me kapacitet 100 cm 3, më pas tretësi avullohet në një vëllim të vogël, pjesa tjetër e tretësit hiqet me një rrymë ajri dhe në balonë shtohet 1 cm 3 benzen.

Në një spektrofluorimetër në një gjatësi vale të dritës emocionuese prej 386 nm në intervalin 400 - 440 nm me një shpejtësi skanimi prej 60 nm/min, spektri i fluoreshencës së mostrës së produktit dhe kampionit të kontrollit me shtimin e benzo(a)pirenit janë regjistruar.

Spektrat e tretësirave regjistrohen në një mënyrë amplifikuese, duke rregulluar hendekun dhe faktorin e amplifikimit sipas zgjidhjes së mostrës së kontrollit në mënyrë që sinjali i benzo(a)pirenit në 406 nm të jetë 0.4 - 0.6 e shkallës së instrumentit. Për çdo zgjidhje, spektri regjistrohet dy herë, duke arritur riprodhueshmëri të mirë. Në spektrogramet e marra në një maksimum në 406 nm, lartësia e vijës spektrale të benzo(a)pirenit për mostrën e produktit dhe kampionin e kontrollit matet në milimetra. Llogaritni vlerën mesatare të lartësive të benzo(a)pirenit sipas dy spektrogrameve. Në nivele të larta të benzo(a)pirenit në produkt, mostrat hollohen me benzinë dhe spektri regjistrohet sërish në të njëjtin modalitet amplifikimi si për kampionin e kontrollit.

Kryeni dy përcaktime paralele.

5.4 Trajtimi i rezultateve

5.4.1 Pjesa masive e benz (a) pirenit në produktin X \,%, ose X 2, mg / kg, kur përdoret metoda e kromatografisë së lëngshme me performancë të lartë, llogaritet me formulat:

(t 1 - t 2) ■ 100 (t g - t 2) t ■ 1000 1000 “t 10

ku mi është masa e benzo(a)pirenit në mostrën e produktit, μg;

m2 është masa e benzo(a)pirenit në kampionin e kontrollit, μg; t është masa e produktit të marrë për analizë, g.

5.4.2 Pjesa masive e benz(a)pirenit në produktin A), %, ose X 2, mg/kg, kur përdoret metoda e spektrofluorimetrisë, llogaritet me formulat:

S st NU- 100 s ST // V t ■ 1000 ■ 1000 ■

ku cst është përqendrimi masiv i benzo(a)pirenit në tretësirën e punës të përgatitur sipas 5.2.4 dhe shtuar në kampionin e kontrollit, μg/cm 3;

lartësia e vijës spektrale të benzo(a)pirenit në spektrogramin e mostrës së produktit, mm; lartësia e vijës spektrale të benzo(a)pirenit në spektrogramin e kampionit të eksperimentit të kontrollit, mm;

V është vëllimi i tretësirës së punës të benzit (a) pirenit të shtuar në kampionin e eksperimentit të kontrollit, cm 3; t është pesha e kampionit të produktit të marrë për testim, g.

Rezultati përfundimtar i testit merret si mesatarja aritmetike e dy përcaktimeve paralele me të njëjtin numër shifrash domethënëse.

Nëse mospërputhja ndërmjet rezultateve të përcaktimeve paralele nuk kalon \X-y - YY 2 |<

< 0,01 dX, где, Х 2 и X- результаты параллельных определений и их среднее арифметическое, а d - норматив контроля сходимости, то среднее арифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива d приведено в таблице 3.

Sipas rezultatit të analizës X dhe vlerës së gabimit relativ d të dhënë në tabelën 3, llogaritni gabimin absolut A = 0, (SH

Rezultati i analizës paraqitet si (X ± A), mg/kg ose % në P = 0.95.

5.5 Kontrolli i saktësisë së rezultateve të analizës

5.5.1 Përsëritshmëria e përcaktimeve të përsëritura kontrollohet për çdo kampion të analizuar sipas 5.3.

5.5.2 Mostrat e punës përdoren për të kontrolluar riprodhueshmërinë. Mostra ndahet në dy pjesë të barabarta dhe analizohet në përputhje me metodologjinë në laboratorë të ndryshëm ose në të njëjtin laborator, duke ndryshuar kushtet e analizës sa më shumë që të jetë e mundur, pra duke përdorur grupe të ndryshme enësh vëllimore, analizat kryhen në ditë të ndryshme ose nga dy. analistë të ndryshëm.

Riprodhueshmëria e analizave të kontrollit konsiderohet e kënaqshme nëse \ X-y - X 2 \<

< 0,01 DX, где Л), Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднее арифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 3.

Frekuenca e kontrollit të riprodhueshmërisë - të paktën një herë në dy javë

Tabela 3 - Gama e matjes, vlera e karakteristikës së gabimit relativ dhe standardet për kontrollin operacional të komponentit të rastësishëm të gabimit relativ (konvergjenca dhe riprodhueshmëria) në një nivel besimi P = 0,95

5.5.3 Për të kontrolluar saktësinë, përdorni mostrat e punës me një shtesë të njohur të benzo(a)pirenit. Mostra ndahet në dy pjesë të barabarta, e para prej të cilave analizohet në përputhje me procedurën dhe shtimi i njohur i benzo(a)pirenit futet në të dytën dhe më pas analizohet gjithashtu në përputhje me procedurën. Vlera e aditivit duhet të jetë 50 - 150% e përmbajtjes së benzapirenit në kampionin e analizuar.

Saktësia e analizave të kontrollit konsiderohet e kënaqshme nëse |L) - X-s \< К, где Л), X и с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена соответственно; К - норматив оперативного контроля точности.

Shkruani në FSUE "STANDARTINFORM" në një PC.

Shtypur në degën e FSUE "STANDARTINFORM" - tip. "Printer Moskë", 105062 Moskë, Lyalin per., 6

GOST R 51650-2000

1 zonë e përdorimit................................................ ......... një

3 Marrja e mostrave ................................................ ................................ 2

4 Metoda e spektrofluorimetrisë në temperaturë të ulët ................................ 2

4.1 Aparatet, materialet dhe reagentët................................................ ... 2

4.2 Përgatitja për testin ..................................................... ..................... 3

4.3 Kryerja e testit ..................................................... ............. .... 3

4.4 Përpunimi i rezultateve................................................ ..................... 6

4.5 Kontrollimi i saktësisë së rezultateve të analizës.......................................... ..... 6

5 Metodat e kromatografisë së lëngshme dhe spektrofluorimetrisë me performancë të lartë për

temperatura e dhomës ................................................ ................................ 7

5.1 Aparatet, materialet dhe reagentët................................................ ... 8

5.2 Përgatitja për testin ..................................................... ..................... 9

5.3 Kryerja e testit ..................................................... ............. ....dhjetë

5.4 Rezultatet e përpunimit................................................ ................ ....13

5.5 Kontrollimi i saktësisë së rezultateve të analizës.......................................... .....................14

6 Kërkesat e sigurisë ..................................................... ................ pesëmbëdhjetë

7 Kërkesat e kualifikimit të operatorit................................................ .15

Shtojca A Bibliografi

STANDARD SHTETËROR TË FEDERATES RUSE

PRODUKTET USHQIMORE Metodat për përcaktimin e pjesës masive të benzo(a)pirenit

Metodat për përcaktimin e fraksionit të benz(a)pirenit të masës totale

Data e hyrjes 2001-07-01

1 zonë përdorimi

Ky standard ndërkombëtar zbatohet për lëndët e para ushqimore, produktet ushqimore, aditivët e ushqimit dhe shijes dhe vendos metoda për përcaktimin e fraksionit masiv të benzo(a)pirenit duke përdorur spektrofluorimetrinë në temperaturë të ulët dhe dhomë dhe kromatografi të lëngshme me performancë të lartë.

Peshore laboratorike për qëllime të përgjithshme të klasës së dytë të saktësisë me kufirin më të lartë të peshës prej 500 g sipas GOST 24104.

Avullues rrotullues IR-1M.

Uji i banjës.

Stufa elektrike shtëpiake me spirale të mbyllur dhe rregullator ngrohje sipas GOST 14919.

Enë Dewar për azot të lëngshëm të çdo kapaciteti

Banja për kromatografi (fotokuveta të emaluara).

Pllaka qelqi me përmasa 15 x 30 dhe 20 x 40 cm.

Balonat K-1-250-29/32 THS, K-1-100-29/32 THS, K-1-500-29/32 THS ose P-1-500-29/32 THS sipas GOST 25336.

Frigoriferë KhIT-1-300-14/23 KhS ose KhIT-1-400-14/23 KhS sipas GOST 25336.

Frigoriferët KhPT-2-400-29/32 KhS dhe KhPT-1-300-29/32 ose KhPT-400-29/32 KhS sipas GOST 25336.

Dephlegmator 250-19/26-29/32 TC ose dephlegmator 300-19/26-29/32 TC sipas GOST 25336.

Provë xhami qelqi P2-10-180 XC sipas GOST 25336.

Gryka П-1-19/26-14/23 ТС ose Н2-19/23 GOST 25336.

Pompë laboratorike me avion uji GOST 25336.

Pipeta me kapacitet 1, 2, 5, 10 cm 3 GOST 29228 dhe GOST 29229.

Gyp VFO-32-POR 100-14/23 XC ose VFO-32-POR 160-14/23 XC sipas GOST 25336.

Tubat e matur P-2-15-14/23 KhS sipas GOST 1770.

Hinkë ndarëse VD-1-500 ose VD-3-500 GOST 25336.

Cilindrat e graduar 1-100, 1-250 ose 3-100, 3-250 GOST 25336.

Kupat për peshimin (kutitë) SV-14/8, ose SV-19/9, ose SV-24/10, ose SV-34/12 sipas GOST 25336.

Termometër me kufij të matjes së temperaturës 0-250 °C me vlerë ndarjeje 1 °C sipas GOST 29224.

Kapilarë qelqi, shufra qelqi.

n.oktan, h., sipas dokumentit normativ.

n.heksan, h., sipas dokumentit normativ.

Klasa teknike e korrigjuar e alkoolit etilik GOST 18300 ose alkool etilik i korrigjuar sipas GOST R 51652.

Fraksioni i eterit të naftës 40 - 70 ° C sipas dokumentit normativ.

Oksid alumini për kromatografi të shkallës së 2-të të aktivitetit sipas dokumentit normativ.

Benz (a) pireni, përmbajtja e substancës kryesore është jo më pak se 98%.

1,12-Benzperylene, përmbajtja e substancës kryesore është jo më pak se 98%.

Lejohet përdorimi i instrumenteve të tjera matëse me karakteristika metrologjike dhe pajisje me karakteristika teknike, si dhe reagentë dhe materiale me cilësi jo më të ulët se ato të treguara.

4.2 Përgatitja për testin

4.2.1 Pastrimi i tretësve

Tretësit (n. oktan, alkool etilik, eter nafte, kloroform dhe n. heksan) distilohen në mënyrën e zakonshme me një kondensator refluks.

4.2.2 Përgatitja e aluminit

Alumini thahet në furrë në një temperaturë prej (250 + 4) ° C për 4 orë dhe ruhet në një enë me një tapë të bluar.

4.2.3 Përgatitja e tretësirës së benz(a)pirenit për kromatografi me shtresë të hollë (tretësirë dëshmitare).

Rreth 10 mg benzo(a)piren peshohen në shishen e peshimit, shtohen disa mililitra eter nafte derisa kampioni të tretet plotësisht.

Tretësira që rezulton transferohet në mënyrë sasiore në një balonë vëllimore me kapacitet 100 cm 3 dhe vëllimi i tretësirës rregullohet në shenjën me eter nafte. Afati i ruajtjes së tretësirës nuk është më shumë se tre muaj në frigorifer.

4.2.4 Përgatitja e tretësirës standarde të benz(a)pirenit

Peshoni (10,0 ± 0,2) mg benzo(a)piren në një shishe peshimi, shtoni disa mililitra n.oktan derisa kampioni të tretet plotësisht. Tretësira e përftuar u transferua në mënyrë sasiore në një balonë vëllimore me tapë të bluar me kapacitet 100 cm 3 dhe u soll në shenjë me n.oktan. Përqendrimi masiv i benzo(a)pirenit në tretësirën që rezulton është 100 µg/cm3. Tretësira ruhet në frigorifer. Afati i ruajtjes së tretësirës nuk është më shumë se tre muaj.

4.2.5 Përgatitja e tretësirave të punës të benzo(a)pirenit

Tretësira pune të benzo(a)pirenit përqendrimi në masë 0,1; 0,04 dhe 0,02 µg/cm 3 në n.oktan përgatiten me hollim sekuencial të tretësirës standarde fillestare të benzo(a)pirenit, të përgatitur sipas pikës 4.2.4, në balona vëllimore me një tapë të bluar me kapacitet 100 cm 3 . Tretësirat ruhen në frigorifer. Afati i ruajtjes së solucioneve nuk është më shumë se një muaj.

4.2.6 Përgatitja e tretësirës standarde 1,12-benzperileni (standardi i brendshëm)

Për përgatitjen e tretësirës fillestare, (10,0 + 0,2) mg 1,12-benzperilen peshohet në një shishe, shtohen disa mililitra n.oktan derisa mostra të tretet plotësisht. Tretësira e përftuar u transferua në mënyrë sasiore në një balonë vëllimore me tapë të bluar me kapacitet 100 cm 3 dhe u soll në shenjë me n.oktan. Përqendrimi masiv i 1,12-benzperilenit në tretësirën që rezulton është 100 µg/cm3. Tretësira ruhet në frigorifer. Afati i ruajtjes së tretësirës nuk është më shumë se tre muaj.

4.2.7 Përgatitja e solucioneve punuese të 1,12-benzperilenit (tretësira standarde të brendshme)

Tretësira pune të përqendrimit në masë të 1,12-benzperilenit 0,01; 0,005; 0,002 dhe 0,001 μg / cm 3

përgatitur në n.oktan nga hollimet e njëpasnjëshme të tretësirës standarde fillestare, të përgatitur sipas pikës 4.2.6, në balona volumetrike me tapë të bluar me kapacitet 100 cm 3 . Tretësirat ruhen në frigorifer. Afati i ruajtjes së solucioneve nuk është më shumë se një muaj.

4.3 Kryerja e testit

4.3.1 Ndarja e benzo(a)pirenit nga produkti

Në një balonë me fund të rrumbullakët me kapacitet 500 cm 3 vendosni një mostër të produktit me peshë 25 g, shtoni në balonë 20 cm 3 ujë të distiluar, 200 cm 3 alkool etilik dhe 20 g hidroksid kaliumi.

Përmbajtja e balonës përzihet me tundje. Balona lidhet me një kondensator me refluks dhe nxehet në një banjë uji me përzierjen e reaksionit duke zier për 3 orë.Më pas në balonë përmes frigoriferit shtohen 150 cm 3 ujë; balona hiqet nga banja dhe ftohet në temperaturën e dhomës.

Pas ftohjes, faza e lëngshme e përzierjes së reaksionit transferohet me dekantim në një gyp ndarës, duke lënë pjesën tjetër të produktit në balonë. 150 cm3 n-heksan shtohen në balonë me mbetjen, përmbajtja e balonës përzihet fuqishëm dhe n-hekzani derdhet në një gyp ndarës.

Hinka mbyllet dhe tundet fuqishëm, më pas fiksohet në një raft dhe lihet të ndajë lëngjet. Për të ndarë emulsionin që rezulton, përzierjes i shtohen 20 cm 3 alkool etilik në një gyp ndarës. Pas ndarjes, faza e poshtme ujore-alkoolike hidhet përsëri në balonë me precipitat dhe ekstrakti i heksanit derdhet në një balonë 500 cm 3.

Ky trajtim i përzierjes së reaksionit kryhet edhe dy herë, duke përdorur 100 cm 3 n-heksan për ekstraktim dhe alkool etilik për ndarjen e emulsionit, në porcione 20 cm 3 .

Në fund të ekstraktimit, mbetjet në balonë dhe hidrolizat hidhen dhe ekstrakti lahet në një gyp ndarës me ujë të distiluar tre herë me 50 cm 3 dhe avullohet në pjesë në një balonë me fund të rrumbullakët me kapacitet prej 250 cm 3 të para-peshuara deri në shifrën e dytë dhjetore në një avullues rrotullues në temperaturën e një banjë uji jo më shumë se 60 °С. Lëreni balonën me ekstraktin në një kapak tymi për të hequr gjurmët e tretësit, pas së cilës peshohet përsëri. Pesha e ekstraktit të nxjerrë përcaktohet nga diferenca midis peshimeve.

Nga ekstrakti në balonë merret 1/5 pjesë në shishe pa peshuar. Balona me pjesën e mbetur të ekstraktit peshohet. Shtoni në shishen me një pjesë të ekstraktit 0,1-0,2 cm 3 tretësirë të benz(a)pirenit "dëshmitar", e përgatitur sipas 4.2.3. Përmbajtja e shishes dhe mbetja në balonë treten në një vëllim të vogël eter nafte.

Për ndarjen kromatografike të ekstraktit, oksidi i aluminit derdhet në mënyrë të barabartë në një pjatë qelqi me përmasa 20x40 cm. Më pas, duke përdorur një shufër qelqi të ndarë në tre pjesë (14, 1 dhe 3 cm) me unaza gome 1 mm të trasha dhe 3 mm të gjera, nivelohet me kujdes oksidi i aluminit.

Tretësirat që rezultojnë aplikohen në mënyrë sasiore në pjatën e përgatitur me kapilarë qelqi: në pjesën e ngushtë - një zgjidhje nga shishja ("dëshmitar"), në pjesën e gjerë - ekstrakti i produktit nga balona. Tretësirat aplikohen në mënyrë të barabartë në një shirit të vazhdueshëm, duke u larguar nga buza e poshtme e pllakës 7-8 cm.

Pllaka vendoset në banjën e kromatografisë në një kënd të lehtë 20° - 25°, derdhet eteri i naftës në mënyrë që të mos arrijë në vijën e aplikimit të mostrës. Banja mbulohet me xham dhe kryhet kromatografia, duke e çuar pjesën e përparme të tretësit në skajin e sipërm të pllakës.

Pa tharjen e pllakës, ajo rrezatohet me dritë ultravjollcë dhe vendndodhja e benzo(a)pirenit në kampionin e provës përcaktohet nga brezi ndriçues "dëshmitar". Shënoni kufijtë e brezit të benzo(a)pirenit në kromatogramin e kampionit të provës. Pllaka thahet në ajër në një kapuç tymi.

Shiriti i oksidit të aluminit i shënuar në kromatogramin e kampionit të provës hiqet nga pllaka duke përdorur një rrëshqitës xhami dhe transferohet në mënyrë sasiore në pllakën poroze të hinkës së filtrit. Hinka lidhet me një balonë me fund të rrumbullakët me kapacitet 100 cm 3 dhe benzo(a)pireni nxirret nga alumini me 50 cm 3 benzen, duke shtuar benzen në pjesë të vogla dhe duke e trazuar aluminin në hinkë me shkop. Benzeni avullohet deri në tharje në një avullues rrotullues në një temperaturë banjë uji jo më shumë se 60 °C. Mbetja në balonë u transferua në mënyrë sasiore me oktan në një provëz. Vëllimi i tretësirës në provëz nuk duhet të kalojë 5 cm 3 .

Në analizën e disa produkteve, nuk ka ndarje të plotë dhe të qartë të përbërësve fluoreshente të kampionit gjatë kromatografisë parësore të ekstraktit të izoluar nga produkti. Në këtë rast, një rrip më i gjerë i oksidit të aluminit është i izoluar në pjatë në nivelin "dëshmitar"; benz(a)pireni nxirret nga alumini me benzen siç përshkruhet më sipër, dhe mbetja e avullimit shpërndahet në etanol dhe ekstrakti alkoolik që rezulton rikromatografohet.

Për ndarjen kromatografike të ekstraktit të alkoolit përdoret një pllakë me përmasa 15 x 30 cm me një shtresë oksidi alumini me trashësi 0,3 mm. Në pjatë ndahen dy shirita me gjerësi 10 dhe 3 cm. Një ekstrakt alkoolik i produktit të analizuar aplikohet në pjesën e gjerë të pllakës duke përdorur një kapilar qelqi dhe një tretësirë e benz (a) pirenit në eter nafte (“dëshmitar” tretësirë) aplikohet në pjesën e ngushtë të pllakës Pllaka vendoset në banjë në një kënd 20 - 25 ° dhe kryhet kromatografia në kloroform, duke e çuar pjesën e përparme të tretësit në skajin e sipërm të pllakës. Në dritën ultravjollcë, një brez "dëshmitar" i oksidit të aluminit me benzo(a)piren të produktit në studim shënohet në "dëshmitar". Pastaj benzo(a)pireni elurohet nga alumini me benzen dhe të gjitha operacionet e mëtejshme kryhen siç përshkruhet më sipër.

GOST R 51650-2000

Një tretësirë e benzo(a)pirenit në n.oktan transferohet në një provëz. Vëllimi i tretësirës nuk duhet të kalojë 5 cm 3 me një mostër fillestare të produktit prej 25 g.

Në tretësirën (ekstraktin) që rezulton, përmbajtja e benzo(a)pirenit përcaktohet me metodën e spektrofluorometrisë në temperaturë të ulët, duke përdorur metodën e shtimit ose metodën standarde të brendshme për vlerësimin sasior.

4.3.2 Përcaktimi i përmbajtjes së benzo(a)pirenit në tretësirën (ekstraktin) e marrë sipas 4.3.1 me metodën e shtimit.

Në tre epruveta hidhni me pipetë 1 cm 3 tretësirë të përftuar të benzo(a)pirenit në n.oktan. Më pas në epruvetën e parë hidhen 2 cm 3 n.oktan. Në epruvetën e dytë hidhen 1,5 cm 3 n.oktan dhe 0,5 cm 3 tretësirë pune të benz(a)pirenit, përqendrimi në masë 0,1 μg/cm 3, i përgatitur sipas 4.2.5. Në epruvetën e tretë shtoni 1 cm 3 n.oktan dhe 1 cm 3 të njëjtën tretësirë pune të benzo(a)pirenit si në epruvetën e dytë.

Analiza spektrofluorimetrike fillon me epruvetën e tretë. Për ta bërë këtë, provëza e tretë vendoset në një enë Dewar me azot të lëngshëm përpara të çarës së hyrjes së spektrofotometrit; vendosni linjën analitike të fluoreshencës së benzo(a)pirenit 403 nm në një gjatësi vale të dritës emocionuese 367 nm. Me rregullimin e fitimit dhe hapjen e çarjes, si dhe duke rregulluar njëkohësisht epruvetën në enën Dewar, sinjali maksimal arrihet nga pajisja e regjistrimit të spektrofotometrit (deri në 50 - 80%), pas së cilës spektrogrami i benzit ( a) pireni regjistrohet në rajonin 401 - 404 nm, duke fiksuar vlerën e spektrofotometrit të pajisjes regjistruese në një gjatësi vale 401 nm. Regjistrimi i spektrit përsëritet dy herë.

Pastaj epruveta e dytë dhe e parë ngrihen në mënyrë sekuenciale në azot të lëngshëm dhe spektrat e fluoreshencës regjistrohen në intervalin e gjatësisë së valës 401 - 404 nm, sigurohuni që ta vendosni stilolapsin e regjistruesit në një gjatësi vale prej 401 nm në të njëjtin pozicion si kur skanoni mostrën në epruvetën e tretë.

Përqendrimi masiv i benzo(a)pirenit në ekstraktin e analizuar përcaktohet sipas grafikut, në të cilin është paraqitur vlera e shtimit të benzo(a)pirenit (μg) përgjatë boshtit të abshisës dhe lartësia e pikut të vija maksimale karakteristike e benzo(a)pirenit në 403 nm vizatohet përgjatë boshtit të ordinatave, e matur nga spektrogramet e marra në milimetra.

Nëse përqendrimi masiv i benzo(a)pirenit në tretësirën e provës bie brenda zonës së përshtatshme për matje, atëherë pikat eksperimentale të marra shtrihen në të njëjtën vijë të drejtë. Ekstrapolimi i kësaj vije të drejtë në kryqëzimin me boshtin e abshisës jep një segment mbi të që korrespondon me përmbajtjen e benzo (a) pirenit në tretësirën pa aditivë, d.m.th., në 1 cm 3 të tretësirës së provës. Nëse përqendrimi në masë i benzo(a)pirenit në tretësirën e analizuar është më i lartë se kufiri i sipërm i diapazonit të përqendrimeve të matura nga pajisja, atëherë tretësira e analizuar hollohet me n.oktan.

4.3.3 Përcaktimi i përmbajtjes së benzo(a)pirenit në një tretësirë (ekstrakt) të marrë sipas 4.3.1 me metodën e standardit të brendshëm

1,12-benzperyleni përdoret si standard i brendshëm. Hidhni 3 cm 3 tretësirë të benz(a)pirenit në n.oktan të përftuar sipas 4.3.1 në një epruvetë dhe vendoseni në një enë Dewar me azot të lëngshëm përpara të çarës së hyrjes së spektrofotometrit, vendosni treguesin analitik. rreshtoni në 403 nm në një gjatësi vale të dritës emocionuese prej 367 nm dhe kryeni regjistrimin e spektrit të tretësirës në intervalin e gjatësisë valore 401 - 409 nm. Nga intensiteti i linjës (sipas lartësisë së majës së maksimumit të vijës karakteristike të benzo(a)pirenit në 403 nm), vlerësohet përmbajtja e përafërt e benzo(a)pirenit në kampion. Në përputhje me këtë vlerësim, atëherë një tretësirë prej 1,12-benzperileni shtohet në një provëz me 3 cm 3 të një tretësire të benz(a)pirenit në n.oktan në një sasi të tillë që intensiteti prej 1,12- benzperileni në spektrin e kampionit në

406.3 nm ishte 3-5 herë më i madh se intensiteti i linjës së benz(a)pirenit në një gjatësi vale prej 403 nm.

Spektri regjistrohet në intervalin e gjatësisë valore 401 - 409 nm dy herë.

Intensiteti i linjave karakteristike të benz(a)pirenit në 403 nm dhe 1,12-benzperilenit në

406,3 nm (përkatësisht H| dhe H 2) përcaktohet nga spektrogramet duke matur lartësitë e majave në maksimum të vijave karakteristike të këtyre përbërjeve në milimetra. Në llogaritjet merrni vlerën mesatare. Është llogaritur koeficienti i raportit (K) i intensitetit të linjës së benzit (a) piren (EGD) me intensitetin e linjës 1,12-benzperileni (EG 2), K = //]/// 2.

Më pas, ky koeficient përcaktohet për tretësirat standarde të benzo(a)pirenit (X st). Për ta bërë këtë, 3 cm 3 tretësirë standarde të benzo(a)pirenit me përqendrim masiv 0,02 dhe 0,04 μg/cm 3 hidhen në dy epruveta. E njëjta sasi e 1,12-benzperilenit derdhet në secilën nga epruvetat si në epruvetën me mostrën. Spektrat e secilës zgjidhje regjistrohen dy herë në intervalin e gjatësisë valore 401 - 409 nm.

Në të njëjtën kohë, është e nevojshme të sigurohet që pozicioni i stilolapsit regjistrues në një gjatësi vale prej 401 nm të jetë i fiksuar në të njëjtin nivel në të gjitha rastet.

Më pas, nga spektrogramet përcaktohet intensiteti i vijave karakteristike të benz(a)pirenit në 403 nm dhe 1,12-benzperilenit në 406,3 nm (përkatësisht W dhe H2). Në llogaritjet merrni vlerën mesatare. Llogaritni K st \u003d H ^ H 2 për çdo përqendrim të benzo (a) pirenit.

Përqendrimi masiv i benzo(a)pirenit në tretësirën e analizuar c, µg/cm 3, llogaritet me formulën:

s st * K/K st, (1)

ku c st është përqendrimi i benzo(a)pirenit në tretësirën standarde, µg/cm3;

K është koeficienti i gjetur nga spektrogrami i tretësirës së analizuar me shtimin e 1,12-benzperilenit;

K C1 - koeficienti i gjetur nga spektrogramet e një tretësire standarde të benz(a)pirenit me shtimin e 1,12-benzperilenit, vlera e të cilit është më afër në vlerë me koeficientin e tretësirës së analizuar me shtimin përkatës të 1, 12-benzperilen.

Bëhen dy përcaktime paralele dhe njëkohësisht një eksperiment kontrolli, i cili kryhet në të gjitha fazat e analizës duke përdorur të gjithë reagentët sipas procedurës, por pa mostër të produktit.

4.4 Trajtimi i rezultateve

Pjesa masive e benzit (a) pirenit L),%, X dhe X 2, mg / kg, llogaritet me formulat:

= (s - er) ■m l V ■ 100 = (s - er) ■ t 1 ■ V (2)

3 t 2 ■ t ■ 1000 ■ 1000 t 2 ■ t '

_ (s - s 0) ■ V ■ t 1 (3)

ku c është përqendrimi i benzo(a)pirenit, i vendosur sipas 4.3.2 ose 4.3.3 në tretësirën (ekstraktin) e produktit të analizuar të marrë sipas 4.3.1, µg/cm3; c0 është përqendrimi i benzo(a)pirenit në tretësirën e eksperimentit të kontrollit të marrë sipas 4.3.1, µg/cm3; V është vëllimi i tretësirës së benzo(a)pirenit të izoluar nga kampioni i analizuar i produktit, cm 3;

/«I - pesha e ekstraktit të izoluar nga produkti i analizuar, g; m 2 - masa e ekstraktit të aplikuar në një shirit të gjerë të pllakës, g; t është masa e mostrës së produktit, g.

Rezultati rrumbullakoset në shifrën e dytë të rëndësishme.

Për rezultatin përfundimtar të përcaktimit, merret mesatarja aritmetike e dy përcaktimeve paralele me të njëjtin numër shifrash domethënëse.

Nëse mospërputhja ndërmjet rezultateve të përcaktimeve paralele nuk kalon |A) - X 2 \<

< 0,01яЖ, где Xi, Х 2 и X- результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое, a d- норматив контроля сходимости, то среднеарифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива контроля сходимости d приведено в таблице 1.

Bazuar në rezultatin e analizës X dhe vlerën e gabimit relativ d të dhënë në tabelën 1, llogaritet gabimi absolut A = 0, (SD mg/kg ose %).

Rezultati i analizës paraqitet si (X ± A), mg/kg ose % në P = 0.95.

4.5 Kontrolli i saktësisë së rezultateve të analizës

Kontrolli i brendshëm operacional (IQA) i cilësisë së rezultateve të analizës përfshin kontrollin e konvergjencës, riprodhueshmërisë dhe saktësisë së rezultateve të analizës.

4.5.1 Përsëritshmëria e përcaktimeve të përsëritura kontrollohet për çdo kampion të analizuar sipas 4.4.

4.5.2 Për kontrollin e brendshëm të riprodhueshmërisë, përdoren mostrat e punës. Mostra ndahet në dy pjesë të barabarta dhe analizohet në përputhje me metodologjinë në laboratorë të ndryshëm ose në të njëjtin laborator, duke ndryshuar kushtet e analizës sa më shumë që të jetë e mundur, pra duke përdorur grupe të ndryshme enësh vëllimore, analizat kryhen në ditë të ndryshme ose nga dy analistë të ndryshëm.

Riprodhueshmëria e analizave të kontrollit konsiderohet e kënaqshme nëse \X^ - X 2 \<

< 0,01 DX, где X/, Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднеарифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 1.

GOST R 51650-2000

Frekuenca e kontrollit të riprodhueshmërisë është të paktën një herë në dy javë.

Tabela 1 - Gama e matjes, vlera e karakteristikës së gabimit relativ dhe standardet për kontrollin operacional të komponentit të rastësishëm të gabimit relativ (konvergjenca dhe riprodhueshmëria) me një nivel besimi P = 0,95

4.5.3 Për të kontrolluar saktësinë, përdorni mostrat e punës me një shtesë të njohur të benzo(a)pirenit. Mostra është e ndarë në dy pjesë të barabarta, njëra prej të cilave analizohet në përputhje me procedurën; në të dytën, futet një shtesë e njohur e benzo(a)pirenit dhe më pas analizohet në përputhje me procedurën. Vlera e aditivit duhet të jetë 50 - 150% e përmbajtjes së benzapirenit në kampionin e analizuar.

Saktësia e analizave të kontrollit konsiderohet e kënaqshme nëse \Xy-X-c\< 0,01 К, где Ху, Xи с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена, соответственно; К- норматив оперативного контроля точности. Норматив оперативного контроля точности рассчитывают по формулам: при проведении внутрилабораторного контроля (Р = 0,90)

K \u003d 0,84 V (A X]) 2 + (A x) 2; (katër)

gjatë kontrollit të jashtëm (P = 0.95)

K \u003d V (A ^) 2 + (A z) 2, (5)

ku A^ + A x janë vlerat e karakteristikës së gabimit që korrespondon me përqendrimin e masës

benzo(a)piren në kampionin me aditiv dhe në kampionin real;

Ay, \u003d 0,01 Xy dhe A x \u003d 0,01d x X, ku Xy dhe X janë fraksioni masiv i benzo (a) pirenit në kampion me shtimin e

dhe në një kampion real, % ose mg/kg.

Vlera e gabimit relativ d x (8y) është dhënë në tabelën 1.

Kontrolli i saktësisë së analizës kryhet të paktën një herë në muaj, si dhe gjatë ndryshimit të reagentëve ose pas një pushimi të gjatë në punë.

Nëse tejkalohen standardet për kontrollin operacional të saktësisë, kryhen analiza të përsëritura. Nëse standardet e specifikuara tejkalohen në mënyrë të përsëritur, analizat pezullohen, arsyet që çojnë në rezultate të pakënaqshme sqarohen dhe ato eliminohen.

Rezultatet e WQA regjistrohen në një ditar të veçantë.

5 Teknika të kromatografisë së lëngshme dhe spektrofluorimetrisë me performancë të lartë në temperaturën e dhomës

Thelbi i metodës qëndron në nxjerrjen e hidrokarbureve, duke përfshirë benzo(a)pirenin, me heksan nga një produkt i trajtuar më parë me një tretësirë alkooli të hidroksidit të kaliumit, izolimin e një fraksioni të hidrokarbureve aromatike policiklike që përmbajnë benzo(a)piren, dhe pastrimi i fraksionit që rezulton nga papastërtitë ndërhyrëse në një kolonë me Sephadex dhe në një shtresë të hollë celuloze të acetiluar, e ndjekur nga përcaktimi sasior i benzo(a)pirenit të izoluar me kromatografi të lëngët me performancë të lartë ose spektrofluorimetri në temperaturën e dhomës.

Gama e vlerave të përcaktuara të fraksionit masiv të benzo(a)pirenit në produktet e analizuara duke përdorur metodën e kromatografisë së lëngshme me performancë të lartë dhe metodën e spektrofluorimetrisë në temperaturën e dhomës është 0,0001-0,002 mg/kg ose 0,1 x 10-7. - 2,0 x 10 -7% . Gama optimale e përqendrimeve të përcaktuara në masë të benzo(a)pirenit në tretësirë kur përdoret metoda e kromatografisë së lëngshme me performancë të lartë është 0,01-0,02 μg/cm 3, kur përdoret metoda e spektrofluorimetrisë - 0,02-0,2 μg/cm 3 .

Artikuj të ngjashëm

Si të skuqni specat në një tigan në shtëpi

Piper zile i pjekur

Receta e ëmbëlsirës Panna cotta klasike, çokollatë, luleshtrydhe, qumësht, dietë

Pana me luleshtrydhe (recetë klasike) Përgatitja: hap pas hapi

Supë me kërpudha-pure me kërpudha të bardha të ngrira

Rrotulla të thjeshta vegjetariane me lakër

Byrek me kreshme ne tepsi pa furre

Receta: Mish derri i zier - Me xhenxhefil Receta me xhenxhefil dhe mish derri

Popullore

Si të bëni dritën e hënës nga mielli i thekës dhe grurit në shtëpi? Lëndët e para për pure gruri për 12 litra. Miell gruri (klasa 1) - 3 kg; Ujë - 12 litra; Enzima A (amilosubtilin) - 1 lugë gjelle me një rrëshqitje; Enzima G...

Byrek i thjeshtë me qershi - pjekje e shpejtë dhe e shijshme Kjo byrek me qershi të ngrirë ma bëri ditën. E përgatita për ardhjen e të ftuarve dhe nuk e humba. Byreku me qershi rezultoi jashtëzakonisht i suksesshëm....

Receta hap pas hapi për petët e gjizës - si të bëni brumë të shijshëm, mbushje të ëmbël ose të kripur Në kulturën sllave, një vend i madh u jepet pjatave kombëtare. Pjatat më të njohura dhe të gjithanshme janë petat dhe petat. Kursi i parë...